METHOD OF DETERMINING CONTENT OF BACTERIA USING MODIFIED MAGNETIC NANOPARTICLES AS TAGS

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: invention relates to biotechnology, namely to electrochemical immunoassay. Method of determination of gram-negative bacteria in analyzed medium is disclosed. In aqueous medium at temperature of 37 °C bacteria are conjugated with magnetic nanoparticles FeO, Fe, NiFeOor MgFeO, modified with dextran. Non-binding nanoparticles are separated using magnetic field. Working electrode made of gold, platinum or graphite-containing materials is placed into working medium, surface of which is modified with antibodies specific to defined strain of bacteria, for immune complex formation on electrode surface during 20 minutes at temperature of 37 °C. Electrode is washed with buffer solution containing normal horse serum and tween-20. Working electrode extracted from analyzed medium is placed in electrochemical cell containing background electrolyte. Content of bacteria is determined by value of electrochemical oxidation response of nanoparticles localized in immunocomplex on surface of working electrode.EFFECT: invention increases sensitivity and accuracy of analysis, lowers detection limit for bacterial cells to 10 CFU/ml, reduces time of analysis.1 cl, 7 dwg, 5 ex Изобретение относится к биотехнологии, а именно к электрохимическому иммуноанализу. Предложен способ определения содержания грамотрицательных бактерий в анализируемой среде. В водной среде при температуре 37°С конъюгируют бактерии с магнитными наночастицами FeO, Fe, NiFeOили MgFeO, модифицированными декстраном. Отделяют несвязавшиеся наночастицы с использованием магнитного поля. Помещают в среду рабочий электрод из золота, платины или графитсодержащих материалов, поверхность которого предварительно модифицируют антителами, специфичными к определяемому штамму бактерий, для образования иммунокомплекса на поверхности электрода в течение 20 мин при температуре 37°С. Промывают электрод буферным раствором, содержащим нормальную лошадиную сыворотку и твин-20. Помещают извлеченный из анализируемой среды рабочий электрод в электрохимическую ячейку, содержащую фоновый электролит. Определяют содержание бактерий по величине электрохимического отклика окисления наночастиц, локализованных в иммунокомплексе на поверхности рабочего электрода. Изобретение позволяет увеличить чувствительность и точность анализа, снизить предел обнаружения клеток бактерий до 10 КОЕ/мл, сократить время проведения анализа. 1 з.п. ф-лы, 7 ил., 5 пр.