HIGH THROUGH-PUT ANALYSIS OF TRANSGENE BORDERS

FIELD: biochemistry.SUBSTANCE: present invention relates to biochemistry, in particular, to a method of determining and sequencing unknown DNA sequences, which flank known sequences in isolated DNA. Method is realised by first performing hydrolysis of isolated DNA, containing a part or all of known polynucleotide sequence and adjoining unknown polynucleotide sequence, with suitable restriction enzymes. Further, method includes synthesizing a complementary strand by hydrolysed polynucleotide restriction fragments using oligonucleotide sequence of a primer, having a chemical binding structure, bound with 5′ end of oligonucleotide sequence of primer. Then said complementary strand is isolated. Further, method includes ligating a single-strand adapter with isolated complementary strand. Method is completed performing two successive PCR amplifications of ligated isolated complementary strand for determination of unknown polynucleotide sequence.EFFECT: present invention improves sensitivity of detecting unknown DNA sequences, which flank known DNA sequence.22 cl, 1 tbl, 7 ex Настоящее изобретение относится к биохимии, в частности к способу определения и секвенирования неизвестных последовательностей ДНК, которые фланкируют известные последовательности в выделенной ДНК. Для осуществления способа сначала проводят гидролиз выделенной ДНК, содержащую часть или всю известную полинуклеотидную последовательность и прилегающую неизвестную полинуклеотидную последовательность, подходящими рестрикционными ферментами. После чего синтезируют цепь комплементарную гидролизованным полинуклеотидным рестрикционным фрагментам с использованием олигонуклеотидной последовательности праймера, имеющей химическую структуру присоединения, связанную с 5′ концом олигонуклеотидной последовательности праймера. Затем выделяют указанную комплементарную цепь. После чего лигируют одноцепочечный адаптер с выделенной комплементарной цепью. В завершении способа выполняют две последовательные ПЦР амплификации выделенной лигированной комплементарной цепи для установления неизвестной полинуклеотидной последовательности. Настоящее изобретение позволяет улучшить чувствительность детекции неизвестных последовательностей ДНК, которые фланкируют известную последовательность ДНК. 2 н. и 20 з.п. ф-лы, 1 табл., 7 пр.