METHOD OF PRODUCING ANALYTICAL TEST SYSTEM FOR MULTIPLEX IDENTIFICATION AND QUANTITATIVE MEASUREMENT OF CONTENT OF PROTEINS OF INTEREST IN BIOLOGICAL SAMPLE BY CONTENT OF CORRESPONDING PROTEOTIPC MARKER PEPTIDES

FIELD: biochemistry.SUBSTANCE: invention relates to a method of producing an analytical test system (MRM-test) for multiplex identification and quantitative measurement of content of protein of interest in a biological sample based on content of corresponding proteotypic marker peptides, including detection of unique for protein proteotypic marker peptide sequences; extraction of at least two proteotypic marker peptide sequences of protein; prediction of peptide fragments; prediction of MRM-test in form of a list of marker peptides, their fragments and best detection parameters; synthetic peptide marker; determination of profile transitions of synthetic marker peptides; optimising MRM-test in accordance with obtained profiles; cleaning peptides; preparation of a biological sample; identification of protein in a biological sample with weir of synthetic peptides; determination of retention time of marker peptides with application of values determined in MRM tests; conducting multiplex calibration measurements; quantitative measurement of content of marker peptides in biological sample; and a judgment on content of protein of interest in a biological sample.EFFECT: invention provides high sensitivity and reduced time for determining proteotypic peptides and target protein of interest.4 cl, 9 dwg, 1 tbl, 7 ex Изобретение относится к области биохимии и касается способа получения аналитической тест-системы (MRM-теста) для мультиплексной идентификации и количественного измерения содержания интересующих белков в биологическом образце по содержанию соответствующих им протеотипических маркерных пептидов, включающего выявление уникальных для белка протеотипических маркерных пептидных последовательностей; отбор по меньшей мере двух маркерных протеотипических пептидных последовательностей белка; предсказание фрагментов пептидов; предсказание MRM-теста в виде перечня маркерных пептидов, их фрагментов и наилучших параметров детекции; синтез маркерных пептидов; определение профиля переходов синтетических маркерных пептидов; оптимизацию MRM-теста в соответствии с полученными профилями; очистку пептидов; подготовку биологического образца; идентификацию белка в биологическом образце с заколом синтетических пептидов; определение значений времени удержания маркерных пептидов с внесением установленных значений в MRM-тесты; проведение мультиплексных калибровочных измерений; количественное измерение содержания маркерных пептидов в биологическом образце; и суждение о содержании ин