METHOD OF PRODUCTION OF RECOMBINANT ANTIGEN G2 OF HANTAVIRUS DOBRAVA IN CELLS OF E coli

FIELD: biotechnology.SUBSTANCE: method is characterised in that the DNA of the structure RNAb indicated on Figure 1, which encodes the fused protein of three parts, where N-terminal position is green fluorescent protein GFP, central - peptide of 73 amino acid residues with the amino acid sequence of SRKKCNFATTPICEYDGNMVSGYKKVMATIDSFQAFNTSYIHYTDEQIEW KDPDGMLKDHLNILVTKDIDFDT, and C-terminal - light chain of double-stranded protein Kunitz-type inhibitor from potato tubers (PKPI-BI), are introduced into cells of E. coli. The cells transformed by this construction are cultured, the biomass is lysed, the insoluble fraction of the lysate is separated by centrifugation. The product of expression in the form of inclusion bodies is solubilised with the denaturant. Chromatography is carried out under denaturing conditions. The resulting product is used for detection of specific antibodies in serum of patients with hemorrhagic fever with renal syndrome.EFFECT: invention enables to obtain the recombinant antigen G2 of Hantavirus Dobrava with increased yield.6 dwg, 1 ex Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу получения рекомбинантного антигена G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli. Способ характеризуется тем, что ДНК конструкции рНК6, указанной на фиг.1, кодирующая слитой белок из трех частей, где N-концевое положение занимает зеленый флуоресцентный белок GFP, центральное - пептид длиной 73 а.о. с последовательностью аминокислот SRKKCNFATTPICEYDGNMVSGYKKVMATIDSFQAFNTSYIHYTDEQIEW KDPDGMLKDHLNILVTKDIDFDT, а С-концевое - легкая цепь двуцепочечного белкового ингибитора типа Кунитца из клубней картофеля (PKPI-BI), вводят в клетки Е.coli. Культивируют трансформированные данной конструкцией клетки, лизируют биомассу, отделяют нерастворимую фракцию лизата центрифугированием. Продукт экспрессии в форме телец включения солюбилизируют с помощью денатуранта. Проводят хроматографию в денатурирующих условиях. Используют полученный продукт для выявления специфических антител в сыворотке больных геморрагической лихорадкой с почечным синдромом. Предложенное изобретение позволяет получать рекомбинантный антиген G2 хантавируса Добрава в клетках Е.coli с увеличенным выходом. 6 ил., 1 пр.