METHOD FOR PREPARING SETARIA ANTIGEN FOR DIAGNOSIS OF DOG'S DIROFILARIASIS

FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention refers to veterinary science and concerns a method for preparing a Setaria antigen. The method comprises homogenising the mature helminthes Setaria labiato-papillosa manually in the cold, extracting homogenated proteins in phosphate-buffered saline pH 7.2-7.4 in ratio 1:10 for 48 hours at +4°C in a magnetic mixer, centrifuging the homogenate and collecting a supernatant at 15 thousand rpm and +4°C for 20 minutes; the extracted supernatant is additionally purified by gel chromatography in a Superose 12 Prep Grade column at flow rate of sodium phosphate buffer (pH 6.0) - 30 ml/h; the antigen-active fractions are collected by ELISA assay with using dog's dirofilariasis positive and negative reference serums.EFFECT: fractions containing the antigen-active protein components and having shown the best results with reference serums are combined, measured for the protein content and used as an antigen for ELISA assay for diagnosis of dog's dirofilariasis. Изобретение относится к области ветеринарии и касается способа получения антигена из сетарий. Способ включает проведение гомогенизации половозрелых гельминтов - Setaria labiato-papillosa вручную на холоде, экстрагирование белков гомогената в фосфатно-солевом буфере рН 7,2-7,4 в соотношении 1:10 в течение 48 часов при +4°С на магнитной мешалке, центрифугирование гомогената и отбор надосадочной жидкости при 15 тыс.об/мин и +4°С в течение 20 минут, надосадочную жидкость - экстракт дополнительно очищают гель-фильтрацией на колонке с сорбентом Superose 12 Prep Grade и скоростью потока натрий-фосфатного буфера (рН 6,0) - 30 мл/час, с последующим отбором антигеноактивных фракций посредством иммуноферментной реакции с помощью положительных и отрицательных при дирофиляриозе собак референс-сывороток. Фракции, содержащие антигенноактивные белковые компоненты и показавшие наилучшие результаты с референс-сыворотками объединяют, измеряют содержание белка и используют в качестве антигена в иммуноферментной реакции (ИФР) для диагностики дирофиляриоза собак. 1 табл.