METHOD FOR DETERMINING ANTHRAX LETHAL FACTOR PROCEEDING FROM IMMUNODETECTION ASSOCIATED WITH POLYMERASE CHAIN REACTION

FIELD: medicine.SUBSTANCE: method under the invention involves determining an anthrax lethal factor (LF) by PCR-associated immunodetection. The LF protein is adsorbed on microplates or microstrips with using a pre-adsorbed specific monoclonal antibody (MCAB). Further, the immobilised LF protein is bound by the biotylated MCAB recognising another epitope of the LF protein. Thereafter, a complex of the LF protein and the biotylated antibody is detected using a noncovalent conjugate of DNA fragments with neutravidin serving as a matrix for PCR amplification with real-time fluorescence signal detection. Fluorescence levels are recorded. Changing the fluorescence levels in the respective plate wells or strip tubes as compared to the reference, the presence of the lethal factor in the analysed samples is stated.EFFECT: method for determining the anthrax lethal factor is characterised by high sensitivity and specificity, allowing diagnosing the lethal factor protein accumulation at the early stages of anthrax infection, beginning an antibiotic therapy of an infected patient in proper time.5 dwg, 5 ex Изобретению предусматривает определение летального фактора (LF) сибирской язвы методом иммунодетекции, сопряженной с ПЦР. Белок LF адсорбируют на микропланшетах или микрострипах с использованием предварительно адсорбированного специфического моноклонального антитела (МКАТ). Далее иммобилизованный белок LF связывают биотилированным МКАТ, узнающим другой эпитоп белка LF. Далее детектируют комплекс белка LF с биотилированным антителом с использованием нековалентного конъюгата фрагментов ДНК с нейтравидином, служащим матрицей для проведения ПЦР-амплификации с флюоресцентной детекцией сигнала в режиме реального времени. Затем регистрируют уровни флюоресценции. По изменению уровня флюоресценции в соответствующих лунках планшета или пробирках стрипа против контрольных определяют присутствие летального фактора в исследуемых образцах. Способ определения летального фактора сибирской язвы характеризуется высокой чувствительностью (0,1 пМ) и специфичностью, позволяющей провести диагностику накопления белка летального фактора на ранних стадиях заражения сибирской язвой, своевременно начать антибиотикотерапию инфицированного. 5 ил., 5 пр.