METHOD FOR FLUORESCENT LABELLING OF cDNA VIRUS OF FLU, TYPE A

FIELD: biotechnologies.SUBSTANCE: method provides for performance of a reaction of multi-segment reverse transcription (M-RT) of virus RNA, matched with reaction of cDNA amplification. Reactions are carried out in one stage with the help of one pair of universal primers selected to highly conservative areas available in all virus segments, in presence of fluorescently labelled nucleotides. The matrix for this reaction is a single-chain RNA of flu virus from analysed biological samples. The quality of the produced fluorescently labelled cDNA of type A flu virus is checked by the method of electrophoresis in 1% agarose body. The proposed method makes it possible to perform quick production of fluorescently labelled amplificates of a virus cDNA for all segments of a virus genome.EFFECT: using this method considerably reduces time required to do detection and subtyping of A flue virus on diagnostic biochips in analysed samples.2 dwg Изобретение относится к области молекулярной биологии и вирусологии. Способ предусматривает проведение реакции мультисегментной обратной транскрипции (М-ОТ) вирусной РНК, совмещенной с реакцией амплификации кДНК. Реакции проходят в один этап при помощи одной пары универсальных праймеров, подобранных к высококонсервативным областям, имеющимся во всех вирусных сегментах, в присутствии флуоресцентно меченных нуклеотидов. Матрицей для этой совмещенной реакции служит одноцепочечная РНК вируса гриппа из анализируемых биологических образцов. Качество полученной флуоресцентно меченной кДНК вируса гриппа типа А проверяют методом электрофореза в 1% агарозном геле. Предложенный способ позволяет проводить быстрое получение флуоресцентно меченных амплификатов вирусной кДНК для всех сегментов вирусного генома. Использование данного способа существенно уменьшает время, необходимое для проведения детекциии и субтипирования вируса гриппа А на диагностических биочипах в анализируемых образцах. 2 ил.