ELECTROCHEMICAL METHOD OF DETERMINING N-ACETYL--D-GLUCOSAMINIDASE

FIELD: chemistry. ^ SUBSTANCE: invention relates to biosensor technology, analytical chemistry and electrochemical determination of N-acetyl---D-glucosaminidase in biological fluids via amperometric determination of phenol which is released during enzymatic hydrolysis of 1-phenyl-M-acetyl--D-glucosaminide in biological fluids. The method involves adding to a biological fluid sample, containing N-acetyl--D-glucosaminidase, a solution of 1-phenyl-M-acetyl--D-glucosaminide in a nitrate buffer, followed by incubation, separation of the formed residue and obtaining a phenol-containing sample which is placed into electrochemical cell containing a buffer solution and an electrochemical tyrosinase biosensor, which is a planar graphite electrode obtained by screen printing, with successively deposited alternating adhesive layer(s) of polydiallyl dimethylammonium chloride and tyrosinase layer(s) as the working electrode, and an amperometric signal is detected, from which activity of N-acetyl--D-glucosaminidase is calculated based on a calibrated curve using a given equation. ^ EFFECT: high sensitivity and simple analysis. ^ 2 cl, 5 ex, 4 dwg Изобретение относится к области биосенсорных технологий, аналитической химии и касается электрохимического определения N-ацетил-β-D-глюкозаминидазы в биологических жидкостях путем амперометрического определения фенола, выделяющегося в процессе ферментативного гидролиза 1-фенил-N-ацетил-β-D-глюкозаминида в биологических жидкостях. Способ заключается в том, что к образцу биологической жидкости, содержащему N-ацетил-β-D-глюкозаминидазу, добавляют раствор 1-фенил-N-ацетил-β-D-глюкозаминида в цитратном буфере с последующей инкубацией, отделением образующегося осадка и получением содержащей фенол пробы, которую помещают в электрохимическую ячейку, содержащую буферный раствор и электрохимический тирозиназный биосенсор, представляющий собой планарный графитовый электрод, полученный методом трафаретной печати, с последовательно нанесенными на него чередующимися адгезивным(и) слоем(ями) полидиаллилдиметиламмоний хлорида и слоем(ями) тирозиназы, в качестве рабочего электрода, и осуществляют регистрацию амперометрического сигнала, по которому рассчитывают активность N-ацетил-β-D-глюкозаминидазы на основании градуировочной зависимости по заданному уравнению. Достигается повышение чувствительности и упрощение анализа. 1 з.п. ф-лы, 5 пр., 4 ил.