METHOD FOR EVALUATION OF NATURAL AUTOANTIBODY LEVEL IN HUMAN BIOLOGICAL FLUIDS

FIELD: medicine. ^ SUBSTANCE: concentration of natural autoantibodies in human biological fluids is evaluated by enzyme immunoassay with the use of a solid phase of physical sorption coated with streptavidin. The solid phase of physical sorption is pre-processed with a biotin-modified antigen and a blocking agent for closing nonspecific binding sites. That is ensured by using proteins biotin-modified by standard technique; a conjugate-containing solution is presented by monoclonal or polyclonal enzyme-marked antibodies reacting with one or all isotopes of human immunoglobulins. A test sample is pre-dissolved in a buffer containins proteins used for closing nonspecific binding sites on the solid phase of physical sorption, thimerosal and Triton-X100. It is followed by treatment with ferric (III) chloride and thermal treatment. A reference solid phase of physical sorption whereon the biotin-modified antigen is not immobilised is applied for the test sample. The number of natural autoantibodies is evaluated by a calibration curve. ^ EFFECT: safety and effectiveness of evaluating the natural autoantibody level in human biological fluids. ^ 3 tbl, 1 dwg, 1 ex Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения концентрации естественных аутоантител в биологических жидкостях человека иммуноферментным анализом. Для этого используют твердую фазу физической сорбции, покрытую стрептавидином. Предварительно производят обработку твердой фазы физической сорбции биотинилированным антигеном и блокирующим агентом для закрытия мест неспецифического связывания. Для этого используют биотинилированные по стандартной процедуре белки, в качестве конъюгатсодержащего раствора используют моноклональные или поликлональные антитела, меченные ферментом, реагирующие с одним или всеми изотопами человеческих иммуноглобулинов. Тестируемый образец предварительно разводят в буфере, содержащем белки, используемые для закрытия на твердой фазе физической сорбции мест неспецифического связывания, тимерозал и Triton-X100. Подвергают воздействию хлоридом железа (III) и производят термическую обработку. Для тестируемого образца применяют контрольную твердую фазу физической сорбции, на которой не иммобилизирован биотинилированный антиген. Количество естественных аутоантител определяют по калибровочной кривой. Изобретение обеспечивает надежность и эффективность количественного определения уровня естественных аутоантител в биолог