METHOD FOR EVALUATION OF NATURAL ANTIBODY LEVEL IN HUMAN BIOLOGICAL FLUIDS BY IMMUNE-ENZYME ASSAY

FIELD: medicine. ^ SUBSTANCE: level of natural autoantibodies in human biological fluids is evaluated by immune-enzyme assay with the use of a solid phase of physical sorption coated with streptavidin. The solid phase of physical sorption is pre-processed with a biotin-modified antigen and a blocking agent for closing nonspecific binding sites. That is ensured by using proteins biotin-modified by standard technique; a conjugate-containing solution is presented by monoclonal or polyclonal enzyme-marked antibodies reacting with one or all isotopes of human immunoglobulins. A test sample is pre-dissolved in a phosphate-buffered saline containing proteins used for closing nonspecific binding sites on the solid phase of physical sorption, thimerosal and Triton-X100. Then it is thermally treated. A reference solid phase of physical sorption whereon the biotin-modified antigen is not immobilised is applied for the test sample. The number of natural autoantibodies is evaluated by a calibration curve. ^ EFFECT: safety and effectiveness of evaluating the natural autoantibody level in human biological fluids. ^ 4 tbl, 2 dwg, 2 ex Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностики, и может быть использовано для определения уровня естественных аутоантител в биологических жидкостях человека иммуноферментным анализом. Для этого используют твердую фазу физической сорбции, покрытую стрептавидином. Предварительно производят обработку твердой фазы физической сорбции биотинилированным антигеном и блокирующим агентом для закрытия мест неспецифического связывания. Для этого используют биотинилированные по стандартной процедуре белки, в качестве конъюгатсодержащего раствора используют моноклональные или поликлональные антитела, меченные ферментом, реагирующие с одним или всеми изотипами человеческих иммуноглобулинов. Тестируемый образец предварительно разводят в фосфатно-солевом буфере, содержащем белки, используемые для закрытия на твердой фазе физической сорбции мест неспецифического связывания, тимерозал и Triton-X100. Подвергают термической обработке. Для тестируемого образца применяют контрольную твердую фазу физической сорбции, на которой не иммобилизирован биотинилированный антиген. Количество естественных аутоантител определяют по калибровочной кривой. Изобретение обеспечивает надежность и эффективность количественного определения уровня естественных аутоантител в биологических жидкостях человека. 4 табл., 2 ил., 2 пр.