METHOD FOR PRODUCING OF HUMAN METHIONINE-FREE INTERFERON-ALPHA2b

FIELD: medicine. ^ SUBSTANCE: what is offered is a new method for producing human methionine-free interferon-alpha2b. The method starts with recombinant plasmid DNA containing a human interferon-alpha2b gene which is foregone by an enteropeptidase proteolysis site, and used to transform Escherichia...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:

Bibliographische Detailangaben
Hauptverfasser:	RJABICHENKO VIKTOR VASIL'EVICH, AKISHINA RAISA ILLARIONOVNA, GLAZUNOV ALEKSANDR VIKTOROVICH, SHIROKOV DMITRIJ ALEKSEEVICH, VEJKO VLADIMIR PETROVICH, CHESTUKHINA GALINA GEORGIEVNA
Format:	Patent
Sprache:	eng ; rus
Schlagworte:	BEER BIOCHEMISTRY CHEMISTRY COMPOSITIONS THEREOF CULTURE MEDIA ENZYMOLOGY FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIREDCHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERSFROM A RACEMIC MIXTURE METALLURGY MICROBIOLOGY MICROORGANISMS OR ENZYMES MUTATION OR GENETIC ENGINEERING ORGANIC CHEMISTRY PEPTIDES PROPAGATING, PRESERVING OR MAINTAINING MICROORGANISMS SPIRITS VINEGAR WINE
Online-Zugang:	Volltext bestellen
Tags:	Tag hinzufügen Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!

Beschreibung
Zusammenfassung:	FIELD: medicine. ^ SUBSTANCE: what is offered is a new method for producing human methionine-free interferon-alpha2b. The method starts with recombinant plasmid DNA containing a human interferon-alpha2b gene which is foregone by an enteropeptidase proteolysis site, and used to transform Escherichia coli cells. The cells are cultured, and inclusion bodies of the synthesised predecessor are isolated. It is followed by partial renaturation of the isolated predecessor in the presence of dithioerythrole preventing closure of disulphide bonds. The predecessor is hydrolysed by the enteropeptidase enzyme with producing human methionine-free interferon-alpha2b. After completion of the predecessor hydrolysis reaction, complete renaturation of human interferon-alpha2b is carried out in the presence of a pair of cystine and cysteine compounds promoting closure of disulphide bonds. The produced protein is purified by a chromatography in a KM-sepharose. ^ EFFECT: higher yield. ^ 5 dwg, 1 ex Изобретение относится к микробиологической промышленности, медицинской биотехнологии и генной инженерии. Предложен новый способ получения безметионинового интерферона-альфа2b человека. Вначале конструируют рекомбинантные плазмидные ДНК, содержащие ген интерферона-альфа2b человека, перед которым расположен сайт протеолиза энтеропептидазой, и трансформируют ими клетки Escherichia coli. Культивируют клетки и выделяют тельца включения синтезированного предшественника. Затем осуществляют частичную ренатурацию выделенного предшественника в присутствии препятствующего замыканию дисульфидных связей дитиоэритриола. Проводят гидролиз предшественника ферментом энтеропептидазой с образованием безметионинового интерферона-альфа2b человека. После завершения реакции гидролиза предшественника проводят полную ренатурацию интерферона-альфа2b человека в присутствии способствующей замыканию дисульфидных связей пары соединений цистин и цистеин. Очистка полученного белка осуществляется методом хроматографии на КМ-сефарозе. 5 ил.