PLASMID VECTOR pE-Lc-LTP, Escherichia coli BACTERIUM STRAIN FOR EXPRESSION OF LIPID-TRANSPORTING LENTIL PROTEINS Lens culinaris AND METHOD FOR PRODUCING SAID PROTEINS

FIELD: medicine. ^ SUBSTANCE: described is a plasmid vector pE-Lc-LTP for protein Lc-LTP expression in Escherichia coli cells, containing a gene of the hybrid polypeptide Trx-Lc-LTP including the amino acid sequence Lc-LTP, a sequence of the protein thioredoxin and an affine mark. Presented is a producer strain of said hybrid polypeptide based on the E.coli bacteria strain. Offered is a method for producing the end protein Lc-LTP by expression of the hybrid polypeptide Trx-Lc-LTP containing it in the cells of said strain, cell destruction, affine purification of the hybrid polypeptide Trx-Lc-LTP on a metalchelate carrier, hybrid protein breakdown in a site located between the sequences Lc-LTP and thioredoxin, and purification of the end protein Lc-LTP by reverse phase HPLC. The invention can find application both in agriculture as factors improving plant resistance to infections, and in medical practice for food allergy diagnostics and treatment. ^ EFFECT: enhanced efficiency and simplification of the technology of lipid-transporting lentil proteins Lens culinaris. ^ 9 cl, 4 dwg, 6 ex Изобретение относится к области биотехнологии. Описан плазмидный вектор pE-Lc-LTP для экспрессии в клетках Escherichia coli белков Lc-LTP, содержащий ген гибридного полипептида Trx-Lc-LTP, включающего аминокислотную последовательность Lc-LTP, последовательность белка тиоредоксина и аффинную метку. Представлен штамм-продуцент данного гибридного полипептида на основе штамма бактерий E.coli. Предложен способ получения целевого белка Lc-LTP путем экспрессии содержащего его гибридного полипептида Trx-Lc-LTP в клетках указанного штамма, разрушения клеток, аффинной очистки гибридного полипептида Trx-Lc-LTP на металлохелатном носителе, расщепления гибридного белка по сайту, расположенному между последовательностями Lc-LTP и тиоредоксина, и очистки целевого белка Lc-LTP с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. Изобретение может найти применение в области сельского хозяйства в качестве факторов, повышающих устойчивость растений к инфекциям, и в медицинской практике для диагностики и лечения пищевой аллергии. Изобретение решает задачу повышения эффективности и упрощения технологии получения липид-транспортирующих белков чечевицы Lens culinaris (Lc-LTP). 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 4 ил.