METHOD OF MELIOIDOZE ANTIGEN ESTIMATE FOR PROTECTIVITY LEVEL

FIELD: chemistry. ^ SUBSTANCE: to estimate protectivity level of melioidoze antigens, they are used as antigens being cytokine inducers on peritoneal macrophages (PM) culture of mice BALB/c. In holes of a 96-holed pad, PMs 200 mcl (105 cells) are introduced, then antigens are added to final concentration 10 mkg/ml, while saline is added in control holes. After incubation within 24 h at 37C and 5% CO2, supernatants are collected, sterilised through filters Millipore 0.22 mcm. Cytotoxic FNO- activity in prepared monokines is evaluated on transplantable cell line L-929 culture distributed on 100 mcl (2105 cells) in holes of a 96-holed pad. After incubation within 24 h prepared monokines 100 mcl are added in three repeatabilities. To intensify FNO- action, actinomycin D 10 mcl is added in the holes to final concentration 1 mkg/ml. After incubation within 24 h, cytotoxic FNO- action is evaluated. FNO- activity is expressed with a number of activity units reciprocal to monokine cultivation ensuring 50% destruction of L-929 cells in a hole ("ôò"50). FNO- activity degree FNO- in experiemnt and control shows protectivity level of melioidoze antigens. ^ EFFECT: method is characterised with responsiveness, simplicity, profitability, it is not associated with using living agents of special danger infections as an examination tool. ^ 2 tbl, 2 ex Для определения уровня протективности мелиоидозных антигенов их используют в качестве антигенов - индукторов цитокинов на культуре перитонеальных макрофагов (ПМ) мышей BALB/c. В лунки 96-луночной планшеты вносят по 200 мкл ПМ (105 клеток) и добавляют антигены до конечной концентрации 10 мкг/мл, в контрольные лунки добавляют физ. раствор. После 24 ч инкубации при 37°С и 5% СО2 супернатанты собирают, стерилизуют через фильтры Millipore 0,22 мкм. Цитотоксическую активность ФНО-α в полученных монокинах определяют на культуре перевиваемой клеточной линии L-929, которые распределяют по 100 мкл (2·105 клеток) в лунки 96-луночной планшеты и после 24 ч инкубации добавляют к ним в трех повторностях по 100 мкл полученных монокинов. Для усиления действия ФНО-α в лунки добавляют по 10 мкл актиномицина Д до конечной концентрации 1 мкг/мл. Через 24 ч инкубации определяют цитотоксическое действие ФНО-α. Активность ФНО-α выражают числом единиц активности, обратным разведению монокинов, обеспечивающему 50% гибель клеток L-929 в лунке (ЦГЕ50). По степени активности ФНО-α в опыте и контроле оценивают уровень протективности мелиоидозных антигенов.