MANUFACTURED PRODUCT USING AND COLLAGEN SOLUTION MANUFACTURING METHOD AND COLLAGEN SEPARATION METHOD OF ANIMAL TISSUE

Postupak odvajanja kolagena iz životinjskog tkiva, čime se dobija kolagen kao 5 do 10% od inicijalne težine tkiva, naznačen time, što se sastoji od sledećih koraka:1. Pažljivog pranja tkiva kosti izolovanog iz svinje sa destilovanom vodom, etanolom i acetonom;2. Sečenja tkiva kosti u oblik krofne i skladištenja na -20°C;3. Pretvaranja u prašak tkiva kosti koji ima veličinu čestice od 1 do 500 mikrometara;4. Pranja tkiva kosti pretvorenog u prašak sa etanolom i destilovanom vodom;5. Tretiranja tako opranog praška od kosti preko noći sa 0,5N HCl dok se meša pri brzini od 10 do 100 obrtaja u minutu;6. Nakon tretmana preko noći, tretiranja praška kosti sa pepsinom (pepsin se tretira u 10 do 50:1 odnosu tkivo:pepsin, i rastvori u 0,1N HCl pre upotrebe);7. Ponavljanja tretmana pepsinom 2 do 5 puta tokom 3 do 7 dana;8. Centrifugiranja rastvora pepsinom tretiranog praška kosti na 4°C i to 12.000 g tokom 30 minuta i potom odvajanja i skladištenja površinskog sloja kao i vraćanja taloga na korak 7;9. Primene konačne koncentracije od 0,5 do 0,8 M NaCl na odvojeni i uskladišteni površinski sloj praćeno tretmanom na 4°C tokom 4 sata do 1 dan;10. Nakon centrifugiranja (12.000 g, 30 min i 4°C) uklanjanjanja taloga i sakupljanja površinskog sloja;11. Titriranja površinskog sloja pod neutralnim uslovima i dodavanja NaCl tako da konačna koncentracija rastvora bude 1,6M NaCl;12. Tretiranja rezultirajućeg rastvora na 4°C tokom 4 sata do 1 dan praćeno centrifugiranjem, i ponovnim uklanjanjem taloga i sakupljanjem površinskog sloja;13. Dodatnog dodavanja NaCl sakupljenom površinskom sloju do konačne koncentracije od 2,6 M NaCl, praćeno stajanjem na 4° tokom 4 sata do 1 dan;14. Centrifugiranja da se ukloni površinski sloj i pranja rezultirajućeg taloga jednom ili dva puta sa 95% etanolom, praćeno resuspendovanjem u destilisanoj vodi;15. Dodavanja 1N HCl resuspendovanom rastvoru u količini od 1 mL: 100 mL odnosu da se postigne potpuna resuspenzija, praćeno titriranjem na 4°C pod neutralnim uslovima;16. Stajanja tako titriranog rastvora na temperaturi od 30 do 37°C tokom 4 sata do 1 dan, praćeno centrifugiranjem; i17. Resuspendovanja tako nataloženog kolagen do koncentracije od 1 do 30 mg/mL u slabo kiselom rastvaraču ili PBS, praćeno skladištenjem na 4°C.Prijava sadrži još 5 patentnih zahteva. A method for separation the collagen from the various animal tissues is disclosed for preparing collagen solution and product using the same. The porcine tissues are processed to have prope