Method for selective trapping of DNA components containing unpaired bases by MutS protein immobilized in solid phase, and its colorimetric designation and quantitative analysis

Sposób selektywnego wychwytywania DNA zawierającego niesparowane zasady przez białko MutS immobilizowane w fazie stałej w małych objętościach roztworu, polega na tym, że białko MutS jest immobilizowane w fazie stałej, a DNA jest nanoszone do środowiska reakcyjnego w buforze, zapewniającym wybiórcze wiązanie fragmentów DNA zawierających niesparowane zasady w obecności fragmentów DNA w pełni komplementarnych. Sposób efektywnego odzyskania DNA wychwyconego przez immobilizowane w fazie stałej białko MutS polega na tym, że fragmenty DNA związane przez białko MutS immobilizowane w fazie stałej są efektywnie eluowane w sposób, który umożliwia ich bezpośrednią identyfikację za pomocą metody PCR. Sposób kolorymetrycznego oznaczenia biotynylowanego DNA wychwyconego przez białko MutS, polega na tym, że białko MutS zaopatrzone w domenę umożliwiającą jego skuteczną immobilizację na podłożu stałym wychwytuje fragmenty biotynylowanego DNA, a jego obecność jest wykrywana dzięki sygnałowi powstającemu w efekcie hydrolizy substratu enzymatycznej domeny reporterowej sprzężonej z awidyną.