Metode for å produsere et polypeptid i en storskala-produksjon cellekultur

Sammendrag Et forbedret system for storskala-produksjon av proteiner ogleller polypeptider i cellekultur, spesielt i media karakterisert ved én eller flere av: i) en kumulativ aminosyre-konsentrasjon stØrre enn ca. 70 mM; ii) et molart kumulativt glutamin til kumulativ asparagin forhold på mindre en...

Ausführliche Beschreibung

Gespeichert in:
Bibliographische Detailangaben
Hauptverfasser: Luan, Yen-Tung, Lasko, Daniel R, Wang, Wenge, Drapeau, Denis, Mercer, James R
Format: Patent
Sprache:nor
Schlagworte:
Online-Zugang:Volltext bestellen
Tags: Tag hinzufügen
Keine Tags, Fügen Sie den ersten Tag hinzu!
Beschreibung
Zusammenfassung:Sammendrag Et forbedret system for storskala-produksjon av proteiner ogleller polypeptider i cellekultur, spesielt i media karakterisert ved én eller flere av: i) en kumulativ aminosyre-konsentrasjon stØrre enn ca. 70 mM; ii) et molart kumulativt glutamin til kumulativ asparagin forhold på mindre enn ca. 2; iii) et molart kumulativ glutamin til kumulativ total aminosyre forhold på n-findre enn ca. 0,2; iv) et molart kumulativt uorganisk ion til kumulativ total aminosyre forhold mellom ca. 0,4 til l; eller v) en kombinert kumulativ glutamin- og kumulativ asparagin-konsentrasjon mellom ca. 16 og 36 mM er gitt. Anvendelse av et slikt system tillater høye nivåer av protein-produksjon og minker akkumulering av visse uønskede faktorer så som ammonium og/eller laktat. I tillegg er kulturmetoder omfattende et temperaturskift, typisk omfattende en reduksjon av temperatur n'ar kulturen har n'add ca. 20-80 % av den maksimale celletetthet, gitt. Altemativt eller i tillegg tilveiebringer foreliggende oppfinnelse metoder slik at, etter å ha nådd en topp, laktat- og/eller animonium-niv'aer i kulturen reduseres over tid. An improved system for large scale production of proteins and/or polypeptides in cell culture, particularly in media characterized by one or more of: i) a cumulative amino acid concentration greater than about 70 mM; ii) a molar cumulative glutamine to cumulative asparagine ratio of less than about 2; iii) a molar cumulative glutamine to cumulative total amino acid ratio of less than about 0.2; iv) a molar cumulative inorganic ion to cumulative total amino acid ratio between about 0.4 to 1; or v) a combined cumulative glutamine and cumulative asparagine concentration between about 16 and 36 mM, is provided. The use of such a system allows high levels of protein production and lessens accumulation of certain undesirable factors such as ammonium and/or lactate. Additionally, culture methods including a temperature shift, typically including a decrease in temperature when the culture has reached about 20-80% of it maximal cell density, are provided. Alternatively or additionally, the present invention provides methods such that, after reaching a peak, lactate and/or ammonium levels in the culture decrease.