IMPROVED BACTERIAL OUTER MEMBRANE VESICLES

Existing methods of meningococcal OMV preparation involve the use of detergent during disruption of the bacterial membrane. According to the invention, membrane disruption is performed substantially in the absence of detergent. The resulting OMVs which retain important bacterial immunogenic components, particularly (i) the protective NspA surface protein, (u) protein NMB2132 and (iii) protein NMB 1870.A Typical process involves the following steps: (a) treating bacterial cells in the substantial absence of detergent; (b) centrifuging the composition from step (a) to separate the outer membrane vesicles from treated cells and cell debris, and collecting the supernatant; (c) performing a high speed centrifugation of the supernatant from step (b) and collecting the outer membrane vesicles in a pellet; (d) re-dispersing the pellet from step (c) in a buffer; (e) performing a second high speed centrifugation in accordance with step (c), collecting the outer membrane vesicles in a pellet; (f) re-dispersing the pellet from step (e) in an aqueous medium. Los metodos existentes de preparacion de OMV meningocosicas involucran el uso de detergente durante la desintegracion de la membrana bacteriana. De acuerdo a la invencion, la desintegracion de las membranas es realizada sustancialmente en ausencia de detergente. Las OMVs resultantes que retienen los componentes inmunogenicos bacterianos importantes, particularmente (i) la proteina superficial NspA protectora, (ii) la proteina NMB2132 y (iii) la proteina NMB 1870. un proceso tipico involucra los siguientes pasos: (a) el tratamiento de las celulas bacterianas en ausencia sustancial de detergente; (b) la centrifugacion de la composicion del paso (a) para separar las vesiculas de la membrana externa de las celulas tratadas y de los desechos celulares, y la recoleccion del sobrenadante, (c) la realizacion de una centrifugacion de alta velocidad del sobrenadante del paso (b) y la recoleccion de las vesiculas de la membrana externa en un boton; (d) la re-dispersion del boton del paso (c) en un amortiguador; (e) la realizacion de una segunda centrifugacion a alta velocidad de acuerdo con el paso (c), la recoleccion de las vesiculas de la membrana externa en un boton; (f) la re-dispersion del boton del paso (e) en un medio acuoso.