AAV MANUFACTURING METHODS

Methods for producing recombinant adeno-associated virus (rAAV) particles include: an expansion phase including increasing the number of cells in at least one culture vessel containing culture medium; introducing into the cells a first polynucleotide sequence including a transgene flanked by AAV inverted terminal repeats, and optionally a second polynucleotide sequence including AAV rep and cap genes, and/or a third polynucleotide sequence including one or more helper genes; a production phase including culturing the cells into which the one or more polynucleotide sequences were introduced and adding calcium (Ca) ions (i.e., salts of Ca2+) to the production phase culture medium; and isolating the rAAV particles. Los métodos para producir partículas de virus adenoasociado recombinante (rAAV) incluyen: una fase de expansión que incluye aumentar la cantidad de células en al menos un recipiente de cultivo que contiene medio de cultivo; introducir en las células una primera secuencia de polinucleótidos que incluye un transgén flanqueado por repeticiones terminales invertidas de AAV y, opcionalmente, una segunda secuencia de polinucleótidos que incluye genes rep y cap de AAV y/o una tercera secuencia de polinucleótidos que incluye uno o más genes auxiliares; una fase de producción que incluye cultivar las células en las que se introdujeron una o más secuencias de polinucleótidos y agregar iones de calcio (Ca) (es decir, sales de Ca2+) al medio de cultivo de la fase de producción; y aislar las partículas de rAAV.