IGF-I POLY (ETHYLENE GLYCOL) CONJUGATES

Herein is reported a method for producing of a polypeptide conjugated to one poly (ethylene glycol) comprising a) providing a nucleic acid encoding an expression construct comprising in 5' to 3' direction a nucleic acid encoding a polypeptide, and a nucleic acid encoding a trypsin site of SEQ ID NO: 01, b) expressing the nucleic acid of a) in a cell and recovering the expression construct from the cell and/or the cultivation medium, c) providing a target peptide with an amino acid sequence of SEQ ID NO: 02 covalently conjugated to a poly (ethylene glycol) at the C-terminal lysine residue, d) incubating the expression construct and the target peptide with the trypsin mutant D189K, K60E, N143H, E151H, and e) recovering and thereby producing the polypeptide conjugated to one poly (ethylene glycol) from the incubation mixture. La presente invención se refiere a un método para producir un polipéptido conjugado a un poli(etilenglicol) que comprende a) proporcionar un ácido nucleico que codifica un constructo de expresión que comprende en la dirección 5' a 3' un ácido nucleico que codifica un polipéptido, y un ácido nucleico que codifica un sitio de tripsina de SEC ID NO: 01, b) expresar el ácido nucleico de a) en una célula y recuperar el constructo de expresión de la célula y/o el medio de cultivo, c) proporcionar un péptido objetivo con una secuencia de aminoácido de SEC ID NO: 02 covalentemente conjugado a un poli(etilenglicol) en el residuo lisina C-terminal, d) incubar el constructo de expresión y el péptido de objetivo con la tripsina mutante D189K, 1C60E, N143H, E151H, y e) recuperar y producir el polipéptido conjugado a un poli(etilenglicol) de la mezcla de incubación.