DÉRIVÉS AMINOESTÉRIFIÉS

L'invention concerne de nouveaux composés qui sont à la fois des inhibiteurs de l'enzyme phosphodiestérase 4 (pde4) et des antagonistes du récepteur muscarinique m3, des procédés de préparation de tels composés, des compositions les contenant et leur utilisation thérapeutique. Dosage de binging m3: des cellules de clones cho-ki exprimant le récepteur m3 humain (swissprot p20309) ont été récoltées dans une solution saline tamponnée au phosphate sans ca ++ / mg ++ et recueillies par centrifugation à 1500 tr / min pendant 3 min. Les pastilles ont été remises en suspension dans du tampon a glacé (tris-hcl 15 mm ph 7,4, mgcl2 2 mm, edta 0,3 mm, egta 1 mm) et homogénéisées par un politron pbi (réglage 5 pendant 15 s). La fraction membranaire brute a été recueillie par deux étapes de centrifugation consécutives à 40000 g pendant 20 min à 4 ° c, séparées par une étape de lavage dans le tampon a. Les pastilles obtenues ont finalement été remises en suspension dans du tampon b (tris hcl 75 mm, ph 7,4, 12,5 mm). Mgcl2, edta 0,3 mm, egta 1 mm, saccharose 250 mm) et des aliquotes ont été stockés à - 80 ° c. Le jour de l'expérience, les membranes congelées ont été remises en suspension dans du tampon c (tris-hcl 50 mm, ph 7,4, mgcb 2,5 mm, edta 1 mm). Le ligand radioélectrique muscarinique non sélectif [3h] -n-méthyl scopolamine (mol. Pharmacol.45: 899-907) a été utilisé pour marquer les sites de liaison à m3. Les expériences de liaison ont été effectuées en double (courbes de concentration en dix points) dans des plaques à 96 puits à une concentration de radioligand de 0,1-0,3 nm. La liaison non spécifique a été déterminée en présence de n-méthyl scopolamine à froid 10 um. Les échantillons (volume final 0,75 ml) ont été incubés à la température ambiante pendant 90 minutes. La réaction a été arrêtée par filtration rapide à travers des plaques unifilter gf / b et deux lavages (0,75 ml) avec du tampon froid c en utilisant un harvester filtermate harvester. La radioactivité sur les filtres a été mesurée par un compteur à scintillation de microplaques tricarb 2500 (perkinelmer). Des composés représentatifs de l'invention, lorsqu'ils ont été testés dans l'un des protocoles mentionnés ci-dessus, ont présenté une ic50 inférieure à 100 nm. Des composés représentatifs de l'invention présentaient une ic50 inférieure à 100 nm à la fois dans les dosages sans cellules pde4 et dans les taux de liaison à m3. Compounds of formula (I), defined herein, are both phosphodiesterase 4 (PDE4)