향상된 단백질 발현 및 이의 방법

일반적으로 본 발명은 관심 대상의, 증가된 양의 하나 이상의 단백질(들)을 생성하는 변형 그람(Gram) 양성 박테리아 세포, 및 증가된 유전적 수용능(genetic competency)을 갖는 변형 그람 양성 박테리아 세포에 관한 것이다. 따라서, 본 발명의 특정한 실시 양태는 관심 대상의 단백질을 발현하는 비변형 (모) 그람 양성 박테리아 세포에 비하여 증가된 양의 상기 단백질을 발현하는 변형 그람 양성 박테리아 세포에 관한 것이며, 여기서, 변형 박테리아 세포는 변이형 RNA-폴리머라아제 (RNAP) β′-서브유닛 폴리펩티드를 코딩하는유전자에서의 적어도 하나의 돌연변이를 포함한다. 특정한 실시 양태에서, 변이형 β′-서브유닛 폴리펩티드를 코딩하는유전자는 변형된 세포의 염색체 내로 통합된다. 다른 실시 양태에서, 변이형 β-서브유닛 폴리펩티드를 코딩하는유전자는 변형된 세포 내로 도입된 염색체외 플라스미드 상에 포함된다. 다른 실시 양태에서, 본 발명은 서열 번호 8에 대한 90%의 서열 동일성 및 서열 번호 8의 위치 796에서의 아스파르트산의 글리신으로의 치환을 포함하는 변형 rpoC 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 구축물의 적어도 하나의 카피를 포함하는 수용성 바실루스 숙주 세포에 관한 것이며, 여기서, rpoC 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 제1 핵산 구축물의 도입 전에는 비-수용성었던 바실루스 숙주 세포에 대하여 외래 폴리뉴클레오티드이다. The present disclosure is generally related to modified Gram positive bacterial cells producing increased amounts of one or more protein(s) of interest and modified Gram positive bacterial cells having increased genetic competency. Thus, certain embodiments of the disclosure are directed to modified Gram positive bacterial cells expressing an increased amount of a protein of interest, relative to an unmodified (parental) Gram positive bacterial cell expressing the same protein of interest, wherein the modified bacterial cell comprises at least one mutation in a rpoC gene encoding a variant RNA-polymerase (RNAP) β′-subunit polypeptide. In certain embodiments, the rpoC gene encoding the variant β′-subunit polypeptide is integrated into the chromosome of the modified cell. In other embodiments, the rpoC gene encoding the variant β′-subunit polypeptide is comprised on an extrachromosomal plasmid introduced into the modified cell. In other embodiments, the disclosure is directed to competent Bacillus host cells comprising at least one copy of a nucleic acid construct encoding a modified rpoC polypeptide comprising 90% sequence identity to SEQ ID NO: 8 and an aspartic acid to glycine substitution at position 796 of SEQ ID NO: 8, wherein the polynucleotide encoding the rpoC polypeptide is foreign to the Bacillus host cell that was non-competent prior to the introduction of the first nucleic acid construct.