Mutated N-carbamoylase with Improved Acid-Stability

PURPOSE: Mutated N-carbamoylase with improved acid-stability is provided, thereby effectively and cheaply producing synthetic D-amino acids without addition of DTT(dithiothreitol). CONSTITUTION: A gene encoding mutated N-carbamoylase has the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 4, 12, 13 or 14, wherein the mutated N-carbamoylase is NC23, Gln23Leu, Val40AAla or Gly75Ser, respectively. A recombinant plasmid pNC23 contains the gene of SEQ ID NO: 4. A transformed Escherichia coli NC23(JM109/pTrc99a/NC23)(KCTC 10164BP) is produced by transforming with the recombinant plasmid pNC23. A method for producing the mutated N-carbamoylase comprises culturing the transformed Escherichia coli NC23(JM109/pTrc99a/NC23)(KCTC 10164BP). A method for producing synthetic D-amino acid comprises reacting the mutated N-carbamoylase with N-carbamoyl-D-amino acid, wherein the N-carbamoyl-D-amino acid is N-carbamoyl-D-para-hydroxyphenylglycine, N-carbamoyl-D-valine or N-carbamoyl-D-serine; and the synthetic D-amino acid is D-para-hydroxyphenylglycine, D-valine or D-serine. 본 발명은 N-카바모일라아제 변이효소를 암호화하는 유전자, 전기 유전자로부터 발현되는 N-카바모일라아제 변이효소, 전기 유전자를 포함하는 재조합 플라스미드, 전기 재조합 플라스미드로 형질전환된 미생물, 전기 미생물을 배양하여, N-카바모일라아제 변이효소를 생산하는 방법, 전기 N-카바모일라아제 변이효소를 이용하여 비천연 D-아미노산을 제조하는 방법 및 전기 N-카바모일라아제 변이효소의 활성여부를 분석하는 활성 착색방법에 관한 것이다. 본 발명의 N-카바모일라아제 변이효소는 야생형의 효소보다 산화적 안정성이 증대되었기 때문에, 이를 이용하여 DTT를 첨가할 필요없이 보다 효율적이고 경제적으로 비천연 D-아미노산을 제조할 수 있다.