CATION CHELATOR HOT START

To provide a method for regulating enzymatic activity in nucleic acid modifying reactions.SOLUTION: Disclosed herein is a method for regulating enzymatic activity in a reaction composition, comprising the steps of: (i) providing a reaction composition comprising: a. at least one enzyme of which activity depends on the presence of divalent cations in the reaction composition; b. a divalent cation; c. a chelating agent of which binding to the cation depends on pH and/or a temperature of the reaction composition; d. a buffer system of which acid dissociation constant is temperature dependent such that a change in temperature results in a change in pH; and e. a substrate for the enzyme; and (ii) changing the temperature in the reaction composition, thereby the divalent cation bound to the chelating agent is released from the complex to activate the enzyme or enhance its activity.SELECTED DRAWING: None 【課題】核酸改変反応における酵素的活性を制御するための方法の提供。【解決手段】（ｉ）ａ．少なくとも１種の酵素であって、該酵素の活性が、反応組成物における二価カチオンの存在に依存する、酵素、ｂ．二価カチオン、ｃ．キレート剤であって、該カチオンの該キレート剤への結合が、該反応組成物のｐＨおよび／または温度に依存している、キレート剤、ｄ．酸解離定数が温度依存性であり、それにより温度における変化が該反応組成物のｐＨの変化をもたらす、緩衝系、ｅ．該酵素のための基質を含む反応組成物を提供する工程、および、（ｉｉ）該反応組成物において温度を変化させる工程であって、それによりキレート剤に結合する二価カチオンが、これらの錯体から放出され、ここで、該酵素は、これにより活性化されるか、またはその活性が上昇される、工程、の工程を含む、反応組成物における酵素活性の制御のための方法。【選択図】なし