METHODS FOR PRODUCING TNFR-FC FUSION PROTEIN CONTAINING IMPURITIES AT INTENDED QUANTITIES

To provide a method for preparing a TNFR-Fc fusion protein mixture containing a target content of hydrophobic chromatogram peak 3, and a method for adjusting the content of hydrophobic chromatogram peak 3 using a hydrophobic chromatographic medium containing an aromatic functional group, which is pre-equilibrated with an equilibration buffer comprising sodium chloride or ammonium sulfate, on a sample comprising a TNFR-Fc fusion protein mixture liquid produced from non-human mammalian cells, and a method for adjusting the content of hydrophobic chromatogram peak 3 by hydrophobic chromatography using an equilibration buffer containing a predetermined concentration of sodium chloride or ammonium sulfate.SOLUTION: The invention provides a method for producing TNFR-Fc fusion proteins using hydrophobic chromatography, comprising adjusting the content of hydrophobic chromatogram peak 3 by hydrophobic chromatography using an equilibration buffer containing a predetermined concentration of sodium chloride or ammonium sulfate so that the peak 3 is contained at a target content. Accordingly, the disclosed methods can be used usefully in production of biomedicines comprising a recombinant protein such as Etanercept produced from an animal cell culture by gene engineering technology.SELECTED DRAWING: None 【課題】本発明は、目的とする含量で疎水性クロマトグラムのピーク３を含む、ＴＮＦＲ-Ｆｃ融合タンパク質の混合物を製造する方法、及び疎水性クロマトグラムのピーク３の含量を調節する方法に関するもので、具体的に、（ａ）哺乳類細胞で生産されたＴＮＦＲ-Ｆｃ融合タンパク質の混合液を含む試料を塩化ナトリウムまたは硫酸アンモニウムを含む平衡緩衝液で前−平衡化された芳香族官能基を含む疎水性クロマトグラフィー媒質を使用するＴＮＦＲ-Ｆｃ融合タンパク質の混合物の製造方法、及び所定の濃度の塩化ナトリウムまたは硫酸アンモニウムを含む平衡緩衝液を用いた疎水性クロマトグラフィーによる疎水性クロマトグラムのピーク３の含量を調節する方法に関するものである。【解決手段】本発明は、疎水性クロマトグラフィーを用いてＴＮＦＲ-Ｆｃ融合タンパク質を生産するにあって、所定の濃度の塩化ナトリウムまたは硫酸アンモニウムを含む平衡緩衝液で平衡化して疎水性クロマトグラフィーを行うことにより、疎水性クロマトグラムのピーク３の含量を調節し、これを目的とする含量で含むようにＴＮＦＲ-Ｆｃ融合タンパク質を製造する方法を提供することができる。したがって、前記提示された方法は、動物細胞培養から遺伝子組換え技術で生産されたエタネルセプトのような組換えタンパク質を含む生物医薬品の製造に有用に使用することができる。【選択図】なし