TEMPLATE-INDEPENDENT LIGATION OF SINGLE-STRANDED DNA

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide ligation reaction mixtures, methods, and kits for improved template-independent intramolecular ligation (circularization) of linear ssDNA (single-stranded DNA).SOLUTION: The invention relates to preparation methods for using the improved ligation reaction mixture for template-independent intramolecular ligation of linear ssDNA molecules to synthesize circular ssDNA molecules using a thermostable RNA ligase. The circular ssDNA molecules obtained using the improved ligation reaction mixtures and methods can be used as templates or the like for amplification by inverse PCR, rolling circle replication, transcription, or massively parallel DNA sequencing. They can be applied, for example, to detection or quantification of a specific nucleic acid sequence for the purpose of gene expression analysis by qPCR or analysis of gDNA copy number variation with microarray and research, screening, medical diagnostics, theranostics, personalized medical treatment or breeding, human or animal medicine, forensics, agriculture, or the like. 【課題】線状ｓｓＤＮＡ（一本鎖ＤＮＡ）の改善された鋳型非依存性分子内ライゲーション（環状化）用のライゲーション反応混合物、方法、及びキットの提供。【解決手段】熱安定性ＲＮＡリガーゼを用いて環状ｓｓＤＮＡ分子を合成する，線状ｓｓＤＮＡ分子の鋳型非依存性分子内ライゲーション用の改善されたライゲーション反応混合物使用の調整方法。改善されたライゲーション反応混合物及び方法を用いて得た環状ｓｓＤＮＡ分子を、逆ＰＣＲ、ローリングサークル複製、転写、又は超並列ＤＮＡシーケンシングによる増幅するための鋳型等として使用でき、例えば、ｑＰＣＲによる遺伝子発現分析又はマイクロアレイを用いたｇＤＮＡのコピー数変化の分析、及びリサーチ、スクリーニング、医学診断、セラノスティクス、個人の医学的治療又はブリーディング、ヒトや動物の医薬、法医学、又は農業などの目的で特定の核酸配列の検出又は定量化に適用することができる。【選択図】なし