IGF-I POLY (ETHYLENE GLYCOL) CONJUGATES

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for the selective enzymatic C-terminal conjugation of a first polypeptide comprising a poly (ethylene glycol) residue to a second polypeptide.SOLUTION: A method for producing a polypeptide is provided which comprises: a) providing a nucleic acid encoding an expression construct comprising in 5' to 3' direction a nucleic acid encoding a polypeptide, and a nucleic acid encoding a trypsin site; b) expressing the nucleic acid of a) in a cell and recovering the expression construct from the cell and/or a cultivation medium thereof; c) providing a target peptide with a specific amino acid sequence covalently conjugated to a poly (ethylene glycol) at the C-terminal lysine residue; d) incubating the expression construct and a target peptide together with a trypsin mutant; and e) recovering and thereby producing the polypeptide conjugated to one poly (ethylene glycol) from an incubation mixture. 【課題】ポリ（エチレングリコール）残基を含む第１ポリペプチドを選択的で酵素的にＣ末端で第２ポリペプチドへとコンジュゲーションするための方法の提供。【解決手段】ａ）５'から３'の方向に、ポリペプチドをコードする核酸、及びトリプシン部位をコードする核酸を含む発現構築物をコードする核酸を提供する工程、ｂ）細胞においてａ）の核酸を発現させ、そして細胞及び／又は培養培地から発現構築物を回収する工程、ｃ）Ｃ末端リジン残基においてポリ（エチレングリコール）と共有結合的にコンジュゲートした特定のアミノ酸配列を有するターゲットペプチドを提供する工程、ｄ）発現構築物およびターゲットペプチドを、トリプシン突然変異体と共にインキュベーションする工程、及びｅ）インキュベーション混合物から１つのポリ（エチレングリコール）にコンジュゲートしたポリペプチドを回収しそれにより産生する工程を含む、ポリペプチドの産生法。【選択図】なし