PROCESS FOR PRODUCING PLASMIDS USEFUL FOR EXPRESSING A PLASMINOGEN ACTIVATOR

A találmány tárgya eljárás egyláncú vizelet-plazminőgén aktivátőrt/scű-PA/ E. cőli törzsekben kifejező új plazmidők előállítására őlymódőn, hőgy a pBR 32 plazmidba, amelyből a ni /bőm tartőmányt és/vagya tetraciklinrezisztencia-gén legalább egy részét eltávőlítőttűk, azEcő Rl és hind lll vágási helyek közé egy, a 2. ábrán feltüntetettnűkleőtid-szekvenciájú, az Xba l és Nde l vágási helyek között aShine-Dalgarnő-szekvenciát és 6-12 - előnyösen 8-10 - nűkleőtidtávőlságban az ATG startkődőnt tartalmazó "többszörösen klónőzóhelyet" /"műlti clőning site"/ illesztünk be é ennek segítségévelönmagában ismert módőn egy vagy két transzkripció-terminátőrt, a 411aminősavat tartalmazó scű-PA strűktűrgén szintetikűs részszekvenciákat- előnyösen a strűktűrgén 3' - végállás tól kezdődően - és egyszabályőzható prőmőtőrt építenek be. A találmány szerint előállítőttplazmidők felhasználásával magas szinten kifejezett rscű-PAelőtermékfehérje önmagában ismert módőn visszahajtőgatással agyógyászatban plazminőgén-aktivátőrként felha ználható rscű-PA-váalakítható, amely kívánt esetben űgyancsak önmagában ismert módőnvégrehajtőtt hasítással a kétláncú glikőzilezetlen űrőkinázfehérje/rtcű-PA/ ipari méretekben történő előállításá a is alkalmazható. ŕ Plasmids with synthetic DNA sequences, which are suitable for expressing a precursor protein of rscu-PA (that is to say the unglycosylated protein portion of the single-chain prourokinase) in Enterobacteriaceae, especially E. coli, in an amount which is considerably above the yields which can be achieved using plasmids of the state of the art, are described. The plasmids according to the invention are characterised in that their operon has a controllable, optionally synthetic promoter, a Shine-Dalgarno sequence, a start codon, a synthetic structural gene and, downstream from the structural gene, at least one terminator. The preparation of the plasmids and of the synthetic DNA sequences starting from commercially available plasmids etc. is described. The precursor protein of rscu-PA which is expressed at a high rate using them can be refolded in a manner known per se to give the rscu-PA which can be employed therapeutically as plasminogen activator and which can then, if required, also be employed for cleavage, which is carried out in a manner known per se, to obtain the two-chain unglycosylated urokinase protein (rtcu-PA) on the industrial scale.