GENERATION OF RECOMBINANT GENES IN PROKARYOTIC CELLS BY USING TWO EXTRACHROMOSOMAL ELEMENTS

Postupak dobivanja i detekcije rekombinantnih sljedova DNA kod prokariota, koji se sastoji u koracima: a) dobivanja prve prokariotske stanice koja sadrži ekstrakromosomsku prijemnu molekulu DNA, kojasadrži prvi slijed DNA kojeg će se rekombinirati i može se autonomno replicirati u prokariotskoj stanici, i ekstrakromosomsku donorsku molekulu DNA, koja sadrži drugi slijed DNA kojeg će se rekombinirati, te u najmanju ruku prvi markerski slijed koji kodira genski produkt i koji se ne može autonomno replicirati u prokariotskoj stanici, b) uzgoja prve prokariotske stanice u selektivnim uvjetima, koji prinuđuju nastajanje suintegracijske ili hibridne molekule između prijemne i donorske molekule DNA, te rekombinaciju dva slijeda DNA koje će se rekombinirati, te koji omogućuju rast i/ili širenje stanice samo ako se eksprimira genski produkt prvog markerskog slijeda, ic) izdvajanja druge prokariotske stanice koja raste i/ili se razvija u selektivnim uvjetima, te sadrži hibridnu molekulu DNA koja sadrži u najmanju ruku prvi markerski slijed, te prvi i drugi rekombinirani slijed DNA zbog rekombinacije između prvog i drugog slijeda DNA, gdje prokariotska stanica ima prolazni ili trajni nedostatak sustava za vršenje mismatch popravaka. Patentsadrži još 47 patentnih zahtjeva. The present invention relates in general to methods for generating and detecting recombinant DNA sequences in prokaryotic cells, in particular bacteria, by using two different extrachromosomal elements, in particular Saccharomyces cerevisiae and plasmids that can be used for conducting the inventive methods. DNA sequences for which these methods are relevant include protein-encoding and non-coding sequences.