Procesos para la producción y purificación de composiciones que contienen ácidos nucleicos

Un proceso de purificación para obtener una composición que comprende un virus vivo, que comprende: separar un fluido acuoso que comprende el virus vivo en una columna de cromatografía de separación por tamaños, detectar por reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa (qPCR) una o más secuencia...

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Hauptverfasser: SHABAN, Samir, BROADT, Trevor, MITRA, George, ZHU, Jianwei, XIE, Yueqing
Format: Patent
Sprache:spa
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Zusammenfassung:Un proceso de purificación para obtener una composición que comprende un virus vivo, que comprende: separar un fluido acuoso que comprende el virus vivo en una columna de cromatografía de separación por tamaños, detectar por reacción cuantitativa en cadena de la polimerasa (qPCR) una o más secuencias de ácido nucleico encontrado en el virus vivo en al menos una fracción del eluato de dicha columna de separación por tamaños; recoger al menos una fracción positiva del eluato de dicha columna de separación por tamaños que contiene una o más secuencias de ácido nucleico encontradas en el virus vivo; agrupar la al menos una fracción positiva; separar la al menos una fracción positiva combinada en una columna de cromatografía de intercambio aniónico que no se une significativamente al virus, y recolectar en al menos una fracción positiva del eluido de flujo continuo de dicha columna de cromatografía de intercambio aniónico que contiene el virus vivo en donde el virus es PVS-RIPO, y en donde el proceso de purificación no incluye un paso que utilice como resina CDM de unión a virus. Described are improved processes for production and purification of nucleic acid-containing compositions, such as non-naturally occurring viruses, for example, recombinant polioviruses that can be employed as oncolytic agents. Some of the described improved processes relate to improved processes for producing viral DNA template. Also described are improved processes for chromatography purification of nucleic acid-containing compositions, in which the nucleic acid is quantified in chromatography fractions using a rapid detection method of the one or more nucleic acid sequences of the nucleic acid-containing composition, such as detection by real time RT-qPCR. In addition, improved processes for production and purification of oncolytic poliovirus, such as PVS-RIPO, are described. Compositions generated using these methods are also provided.