Métodos y dispositivos para compensación de interferencia espectral en la amplificación multiplex de ácidos nucleicos

Método de compensación para interferencia espectral en amplificación multiplex de ácidos nucleicos, que comprende: un proceso de calibración que comprende: - realizar al menos una amplificación de ácido nucleico singleplex de una muestra de ácido nucleico usando una sonda de detección, en el que la...

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1. Verfasser: LUDOWISE, Peter D
Format: Patent
Sprache:spa
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Zusammenfassung:Método de compensación para interferencia espectral en amplificación multiplex de ácidos nucleicos, que comprende: un proceso de calibración que comprende: - realizar al menos una amplificación de ácido nucleico singleplex de una muestra de ácido nucleico usando una sonda de detección, en el que la amplificación de ácido nucleico se produce durante una pluralidad de periodos de interrogación; - a partir de la amplificación de ácido nucleico, adquirir datos de amplificación que indican una cantidad de ácido nucleico presente para cada uno de la pluralidad de periodos de interrogación; y - en función de los datos de amplificación, determinar un valor de corrección de la interferencia asociado a un vecino espectral cercano a la sonda de detección para reducir la interferencia espectral del vecino espectral cercano; comprendiendo además el método un análisis de la amplificación de ácido nucleico que incluye aplicar el valor de corrección de la interferencia obtenido del proceso de calibración a los datos de amplificación recogidos de la amplificación multiplex de ácidos nucleicos de muestras de ácido nucleico, en el que el valor de corrección de la interferencia determinado es la proporción de una señal detectada para el vecino espectral cercano con respecto a la señal detectada para los datos de amplificación de la sonda de detección, en el que el vecino espectral cercano se determina basándose en una distancia desde un pico de fluorescencia del colorante objetivo de la sonda de detección hasta el pico de fluorescencia de un colorante objetivo vecino, en el que el pico de fluorescencia del colorante objetivo de la sonda de detección y el pico de fluorescencia del colorante objetivo del vecino espectral cercano están separados por una distancia menor que una distancia umbral, y en el que aplicar el valor de corrección de la interferencia a los datos de amplificación comprende: - sustraer una señal de fondo de la señal detectada para los datos de amplificación para obtener una señal corregida por el fondo; y - sustraer, de la señal corregida por el fondo, un producto del valor de corrección de la interferencia y la señal detectada por el vecino espectral cercano. Compensation for spectral crosstalk in multiplex nucleic acid amplification is disclosed, comprising: a calibration process comprising performing at least a single-plex nucleic acid amplification of a nucleic acid sample using a detection probe, wherein the nucleic acid amplification occurs over a plur