Células modificadas genéticamente para el ensayo de transferencia de energía por resonancia con el resto del sustrato de sinaptobrevina

Una célula genéticamente modificada, que comprende: un ácido nucleico que comprende una secuencia de nucleótidos que codifica una proteína híbrida que tiene una estructura de A-B-C-D, en donde A comprende un dominio transmembrana que no es escindible por una proteasa BoNT, B comprende una primera proteína fluorescente, C comprende una secuencia de reconocimiento y escisión de proteasa BoNT, y D comprende una segunda proteína fluorescente; en donde el dominio transmembrana se inserta a través de una membrana lipídica de la célula de manera que B, C y D se ubican en el mismo lado de la membrana lipídica, y en donde el ácido nucleico comprende un elemento promotor adecuado para la expresión de la proteína híbrida en la célula genéticamente modificada. Compositions and methods for analyzing intracellular BoNT protease activity, and especially BoNT/B, BoNT/G, BoNT/D, and/or BoNT/F protease activity are provided. Most preferably, cells express one or more recombinant hybrid proteins that include one or more fluorescent proteins and at least one BoNT protease recognition and cleavage sequence, and analysis is performed using FRET analysis.