Método para determinar ácidos nucleicos por reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real y un dispositivo para su implementación

El método de identificación de ácidos nucleicos por una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real incluyendo - introducción de muestras líquidas conteniendo ácido nucleico a zonas de reacción (1) sobre la superficie superior de un sustrato termoconductor (3) de un microchip (10); - aislamie...

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Hauptverfasser: Stroganov, Alexander Anatolievich, Slyadnev, Maksim Nikolaevich
Format: Patent
Sprache:spa
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Beschreibung
Zusammenfassung:El método de identificación de ácidos nucleicos por una reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real incluyendo - introducción de muestras líquidas conteniendo ácido nucleico a zonas de reacción (1) sobre la superficie superior de un sustrato termoconductor (3) de un microchip (10); - aislamiento de las muestras introducidas (2) de la atmósfera; - contacto del ácido nucleico de la muestra (2) con componentes de la reacción en cadena de la polimerasa durante el ciclo térmico de las muestras (2) con extracción de calor a través de la superficie exterior del microchip (10); - detección fluorescente del cambio de la cantidad de los productos de reacción en cadena de la polimerasa durante el ciclo térmico; - identificación de la cantidad del ácido nucleico inicial en las muestras (2) por la dinámica de crecimiento de la señal fluorescente, caracterizado porque el microchip (10) se usa con el sustrato termoconductor (3) con el coeficiente de conductividad térmica superior a 1 W/cm·K y con el coeficiente de difusividad térmica superior a 0,6 cm2/s, donde las dimensiones de la zona de reacción se eligen desde el rango de 101-104 μm en longitud y anchura y 101- 103 um en profundidad, preferiblemente, 5 x 102-5 x 103 μm en longitud y anchura, y 2x102-5x102 μm en profundidad, donde las zonas de reacción (1) sobre la superficie del microchip (10) están separadas del sustrato termoconductor (3) por una capa de un material pasivante (4) que está unido de forma covalente a la superficie del sustrato termoconductor (3) mientras que las muestras introducidas (2) están aisladas separándolas de la atmósfera por una capa de líquido (5) inmiscible con agua que se retiene sobre la superficie superior del sustrato termoconductor (3) por medio de una barrera periférica (6), no excediendo de 0,04 s la relación de la masa térmica agregada del microchip (10) con muestras introducidas (2) y la capa del líquido (5) inmiscible con agua a la conductancia térmica del sustrato de microchip (3), donde un material del sustrato termoconductor (3) es aluminio. The invention refers to molecular biology, medicine, biotechnology and is related to performance of Polymerase Chain Reaction and device for its implementation with real-time registration of reaction-product build-up. The task of the invention is solved as a result of using the method and device for its implementation for identification of nucleic acids by a real-time polymerase chain reaction including introduction of liquid samp