Método de detección de una diana de nucleótido sencillo

Un método de detección de una diana de nucleótido sencillo, caracterizado por que comprende la etapa de acoplamiento de dicha diana a una sonda usando una polimerasa y una ligasa para crear una sonda usada que es completamente de doble cadena, en la que la sonda comprende un sitio de captura que con...

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Hauptverfasser: NATALE, Alessandra, BALMFORTH, Barnaby, FRAYLING, Cameron Alexander, ISAAC, Thomas Henry, SOARES, Bruno Flavio Nogueira de Sousa, BREINER, Boris, AMASIO, Michele
Format: Patent
Sprache:spa
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Beschreibung
Zusammenfassung:Un método de detección de una diana de nucleótido sencillo, caracterizado por que comprende la etapa de acoplamiento de dicha diana a una sonda usando una polimerasa y una ligasa para crear una sonda usada que es completamente de doble cadena, en la que la sonda comprende un sitio de captura que consiste en un nucleótido sencillo complementario a dicha diana cuyos extremos están acoplados a dos regiones de oligonucleótidos de doble cadena en el que al menos una de las regiones oligonucleotídicas comprende elementos detectables que tienen una propiedad de detección característica y en el que los elementos detectables están dispuestos sobre la región de oligonucleótidos de manera que la propiedad de detección es menos detectable que cuando el mismo número de elementos detectables se une a un número correspondiente de nucleótidos sencillos. Disclosed is a biological probe characterised in that it comprises a single-stranded nucleotide region the ends of which are attached to two different oligonucleotide regions wherein at least one of the oligonucleotide regions comprises detectable elements having a characteristic detection property and wherein the detectable elements are so arranged on the oligonucleotide region that the detectable property is less detectable than when the same number detectable elements are bound to a corresponding number of single nucleotides. The biological probe is especially useful for capturing single nucleotides or single-stranded nucleotides to create a used probe which can be degraded by means of a restriction enzyme and an exonuclease to generate single nucleotides carrying a detectable element in a form which can be detected. Typically the detectable elements are fluorophores and the corresponding characteristic fluorescence is rendered undetectable in the probe by for example the use of multiple adjacent fluorophores or mixtures of fluorophores and quenchers attached thereto. Preferably the single stranded nucleotide region is comprised of a single nucleotide whose associated nucleotide base is one of the characteristic of the nucleotides bases found in DNA or RNA.