Partículas alfavíricas y métodos de preparación

Un método para preparar partículas de replicón alfavírico (ARP) portadoras de mutaciones que confieren la capacidad de unión a glicosaminoglicano en células de mamífero, comprendiendo dicho método las etapas de: (a) introducir un ácido nucleico de replicón alfavírico en una célula hospedadora permisiva de alfavirus, comprendiendo dicho ácido nucleico de replicón al menos una señal de empaquetamiento vírico y al menos una secuencia de codificación heteróloga expresable en dicho ácido nucleico de replicón alfavírico, en el que dicha célula hospedadora comprende al menos una función colaboradora, produciendo una célula hospedadora modificada; (b) cultivar dicha célula hospedadora modificada en condiciones que permitan la expresión de la al menos una función colaboradora, que permite la replicación de dicho ácido nucleico de replicón alfavírico y el empaquetamiento de dicho ácido nucleico de replicón alfavírico, formando ARP; (c) poner en contacto las células hospedadoras modificadas después de la etapa (b) con una disolución acuosa de lavado salino que tiene una fuerza iónica de 0,5 a 5 M para liberar las ARP con capacidad de unión a glicosaminoglicano en la disolución acuosa, produciendo una disolución que contiene ARP; (d) recoger las ARP de la disolución que contiene ARP de la etapa (c), seguido de cromatografía de afinidad con heparina. Provided herein are methods for producing alphavirus replicon particles in high yield; replicon RNAs are electroporated into permissive cells, where the cells are at a relatively high density, together with at least one helper nucleic acid providing the necessary functions for packaging. After a growth period in appropriate medium, alphavirus replicon particles are harvested from the surfaces of the cells in which they were produced using a salt wash in which the salt concentration is from about 0.2 to about 5 M sodium chloride, calcium chloride, magnesium chloride, potassium chloride, ammonium acetate, ammonium bicarbonate, among others. After dilution, if necessary, the particles can be purified by a suitable chromatographic technique.