Inmunoensayos que muestran reactividad cruzada reducida con metabolitos de analito de fármacos hidrófobos

Un inmunoensayo para evaluar la cantidad de un analito de interés en una muestra de ensayo, en el que el analito es un fármaco hidrófobo que se metaboliza para formar uno o más metabolitos de reacción cruzada, comprendiendo el inmunoensayo las etapas de: (a) poner en contacto la muestra de ensayo con uno o más reactivos de pretratamiento para formar una primera mezcla, en la que dichos uno o más reactivos de pretratamiento lisan cualquiera de las células y solubilizan cualquier analito presente en la muestra de ensayo; (b) poner en contacto la primera mezcla con un anticuerpo específico para el analito para formar una segunda mezcla que comprende un complejo del anticuerpo con analito o metabolito; (c) lavar la segunda mezcla para retirar cualquier analito y cualquier metabolito que no haya formado complejo con el anticuerpo y para formar una tercera mezcla en la que la concentración de analito disminuye dentro de un orden de magnitud, es decir, un punto decimal de la constante de disociación de equilibrio (KD) del anticuerpo para el analito; (d) poner en contacto la tercera muestra con un compañero de unión específico del anticuerpo marcado con un marcador detectable ("indicador") para formar una cuarta mezcla que comprende un complejo del anticuerpo con el indicador ("complejo anticuerpo-indicador");(e) lavar la cuarta mezcla para retirar cualquier indicador que no haya formado complejo con el anticuerpo; y (f) detectar el complejo anticuerpo-indicador como una medida de la cantidad de analito presente en la muestra, en el que el inmunoensayo tiene menos de un 10% de reactividad cruzada con uno cualquiera o más metabolitos de reacción cruzada presentes en la muestra. The present disclosure provides among other things immunoassays exhibiting reduced cross-reactivity with analyte metabolites. Additionally, the present disclosure provides diagnostic immunoassays to determine the concentration or level in a test sample of a hydrophobic drug that metabolizes in vivo or in vitro to form cross-reacting metabolites wherein cross-reactivity with such metabolites of the drug analyte is reduced. In particular, the disclosure provides such immunoassays where the hydrophobic drug is an immunosuppressant drug such as cyclosporine A.