DETECCION DE LA UNION DE RECOMBINACION DE ADN

Un método para determinar la presencia o ausencia de un polinucleótido de inserción integrado en un sitio de unión en una secuencia polinucleotídica diana, comprendiendo el método, poner en contacto el polinucleótido diana con un primer cebador, un segundo cebador, un polinucleótido bloqueante, una polimerasa, y uno o más nucleótidos trifosfato, en el que: (i) el polinucleótido diana comprende una cadena polinucleotídica que comprende un sitio de unión que, cuando un polinucleótido de inserción integrado está ausente, abarca en un lado una primera secuencia diana y en el otro lado una segunda secuencia diana que es contigua a la primera secuencia diana, (ii) el polinucleótido bloqueante hibrida con la primera y segunda secuencias diana contiguas cuando el polinucleótido de inserción integrado está ausente, (iii) el primer cebador hibrida con una primera región de la primera secuencia diana que está próxima al sitio de unión, de manera que (iv) el segundo cebador hibrida con una segunda región de la primera secuencia diana que está lejos del sitio de unión, en el que el segundo cebador es capaz de cebar la síntesis de una copia de la primera secuencia diana que comprende la primera y segunda regiones de la primera secuencia diana, de manera que cuando una secuencia de inserción integrada está presente en el sitio de unión, el primer y segundo cebadores causan la amplificación exponencial de la primera y segunda regiones de la primera secuencia diana, y cuando una secuencia de inserción integrada está ausente del sitio de unión, el polinucleótido bloqueante hibrida con la primera y segunda secuencias diana contiguas de manera que se inhibe la amplificación de la primera y segunda regiones de la primera secuencia diana, según lo cual se determina la presencia o ausencia del polinucleótido de inserción integrado en el sitio de unión en el polinucleótido diana. The present invention provides methods, compositions and kits for detecting the presence or absence of an integrated insertion polynucleotide.