CEBADOR MARCADO PARA USO EN LA DETECCION DE ACIDOS NUCLEICOS DIANA

LA INVENCION SE REFIERE A UN CEBADOR MARCADO (POR EJEMPLO PARA LA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA), EL CUAL ESTA MARCADO EN LOS DOS EXTREMOS DE LA HEBRA OLIGONUCLEOTIDICA, CON UNA MOLECULA DE COLORANTE MARCADORA Y UNA MOLECULA APAGADORA. EN DICHO CEBADOR, AL MENOS LA ULTIMA BASE DEL EXTREMO 3'' NO ES COMPLEMENTARIA CON LA SECUENCIA DE ADN DESTINADA A SER AMPLIFICADA. SE DESCRIBE ASIMISMO UN PROCEDIMIENTO DE DETECCION DE UNA SECUENCIA DE ADN (POR MEDIO DE LA REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA), UTILIZANDO DICHO CEBADOR MARCADO. DICHO PROCEDIMIENTO EMPLEA PARA LA AMPLIFICACION UNA O MAS ADN POLIMERASAS TERMOESTABLES, UNA DE LAS CUALES POSEE ASIMISMO PROPIEDADES DE CORRECTORA DE PRUEBAS Y LIBERA LAS BASES NO APAREADAS DEL CEBADOR MARCADO, JUNTO CON LA MOLECULA APAGADORA QUE ESTA UNIDA AL MISMO, PROVOCANDO UN INCREMENTO DE LA FLUORESCENCIA A LA LONGITUD DE ONDA DEL COLORANTE MARCADOR, E INDICANDO POR TANTO LA FORMACION DE LA SECUENCIA DE ADN MARCADA CON DICHO COLORANTE FLUORESCENTE. A labeled primer (for example for the polymerase chain reaction) is described, which primer is labeled at the two ends of the oligonucleotide strand with a reporter dye molecule and a quencher molecule, and in which labeled primer at least the last base at the 3' end is not complementary to the DNA sequence to be amplified. A process for detecting a DNA sequence (by means of the polymerase chain reaction) using the labeled primer is also described, which process uses, for the amplification, one or more thermostable DNA polymerases, one of which also possesses proof-reading properties and releases the unpaired bases of the labeled primer together with the quencher molecule which is attached thereto, resulting in an increase in the fluorescence at the wavelength of the reporter dye and thereby indicating the formation of the DNA sequence which is labeled with this fluorescent dye.