UN METODO DE DESARROLLO MOLECULAR IN VITRO DE UNA FUNCION DE PROTEINA

Un método para generar una secuencia de polinucleótidos o población de secuencias desde las secuencias de polinucleótido de filamento simple codificando una o más proteinas causales, el método comprende los pasos de: a) suministrar una primera población de moléculas de polinucleótidos de filamento simple, la primera y segunda poblaciones juntas constituyen los filamentos positivos y negativos de la secuencia de polinucleótidos progenitores; b) realizar una reacción para la asimilación de las primera y segunda poblaciones de moléculas de polinucleótidos de filamento simple con una exonucleasa para generar las correspondientes poblaciones de fragmentos de polinucleótidos de filamento simple; c) contactar dichos fragmentos de polinucleótidos generados desde los filamentos positivos con fragmentos generados desde los filamentos negativos; y d) amplificar los fragmentos que templan a cada otro para generar al menos una secuencia de polinucleótidos codificando una o más proteínas causales que tienen características alteradas como se comparó con una o más proteinas causales codificadas por dichos polinucleótidos progenitores. en donde, en el paso (b), al menos un parámetro de la reacción usada para asimilación de la primera población de moléculas de polinucleótidos de filamento simple es diferente del parámetro(s) equivalente(s) usado(s) en la reacción para la asimilación de la segunda población de moléculas de polinucleótidos de filamento simple. A method for in vitro molecular evolution of protein function The invention provides a method for generating a polynucleotide sequence or population of sequences from parent single-stranded polynucleotide sequences encoding one or more protein motifs, comprising the steps of (a) providing a first population of single-stranded polynucleotide molecules and a second population of single-stranded polynucleotide molecules, the first and second populations together constituting plus and minus strands of parent polynucleotide sequences, (b) carrying out a reaction for digesting the first and second populations of single-stranded polynucleotide molecules with an exonuclease to generate corresponding populations of single-stranded polynucleotide fragments, (c) contacting said fragments generated from the plus strands with fragments generated from the minus strands and optionally, adding primer sequences that anneal to the 3' and 5'ends of at least one of the parent polynucleotides under annealing conditions, and (d) amplifying t