METODO PARA LA EVOLUCION MOLECULAR IN VITRO DE UNA FUNCION PROTEINICA

Un método para generar una secuencia o una población de secuencias de polinucleótidos a partir de secuencias de polinucleótidos madre de hebra sencilla que codifican uno o más motivos de proteína, que comprende los pasos de: a) proporcionar ADN de hebra sencilla que constituye hebras de más y menos de las secuencias de polinucleótido madre; b) digerir las secuencias de polinucleótidos de hebra sencilla con una exonucleasa para generar poblaciones de fragmentos de hebra sencillas; c) poner en contacto dichos fragmentos generados de las hebras más con fragmentos generados de las hebras menos y opcionalmente, añadir las secuencias de plantilla que se fusionan a terminales 3'' y 5'' de al menos uno de los polinucleótidos madre en condiciones de fusión; d) amplificar los fragmentos que se fusionan entre sí para generar al menos una secuencia de polinucleótidos que codifica uno o más motivos de proteína teniendo características alteradas en comparación con el uno o más motivos de proteína codificados por dichos polinucleótidos madre. The invention provides a method for generating a polmucleotide sequence or population of sequences fromparent single stranded polynucleotide sequences encoding one or more protein motifs, comprising the steps of a) providing single stranded DNA constituting plus and minus strands of parent polynucleotide sequences; b) digesting the single stranded polynucleotide sequences with an exonuclease to generate populations of single stranded fragments; c) contacting said fragments generated from the plus strands with fragments generated from the minus strands and optionally, adding primer sequences that anneal to the 3' and 5' ends of at least one of the parent polynucleotides under annealing conditions; d) amplifying the fragments that anneal to each other to generate at least one polynucleotide sequence encoding one or more protein motifs having altered characteristics as compared to theone or more protein motifs encoded by said parent polynucleotides. Preferably, the exonuclease is BAL 31.