Biochemical and immunological applications of a rat glutation transferase-histidine decarboxylase fusion protein

Biochemical and immunological applications of a rat glutation transferase-histidine decarboxylase fusion protein. By reverse transcription (RT) and chain amplification (PCR) a rat histidine decarboxylase cDNA with residues from 1 to 512 (rHDC1/512) was obtained and this was used to construct a recombinant plasmid capable of expressing the fusion of glutation transferase (GST) with rHDC1/512. Purification of polypeptides with HDC activity is considerably simplified and cheapened through the use of this fusion (GST-rHDC1/512) in comparison with the acquisition of HDC protein from natural sources. The fusion protein can be used to search for and characterise antihistamine drugs which have histidine decarboxylase activity as a target and for the investigation of post- translational affinity, degradation and modification of the HDC polypeptide. Starting with the GST-rHDC1/512 fusion protein polyclonal antibodies capable of recognising the original rat HDC antigen were obtained, and these are of interest in the development of purification and diagnostic methods for the protein. Aplicaciones bioquímicas e inmunológicas de una proteína de fusión glutation transferasa-histidina descarboxilasa de rata. Mediante transcripción inversa (RT) y amplificación en cadena (PCR) se obtuvo un cDNA de histidina descarboxilasa derata residuos del 1 al 512 (rHDC1/512), que fue utilizado para la construcción de un plásmido recombinante capaz de expresar una fusión de la glutation transferasa (GST) con la rHDC1/512. La purificación de polipéptidos con actividad HDC se ve considerablemente simplificada y abaratada con la utilización de esta fusión (GST-rHDC1/512), en comparación con la obtención de proteína HDC de fuentes naturales. La proteína de fusión se puede utilizar para la búsqueda y caracterización de fármacos antihistamínicos que tengan como diana la actividad histidina descarboxilasa, y para estudios de afinidad, degradación y modificaciones post-traduccionales del polipéptido HDC. A partir de la proteína de fusión GST-rHDC1/512 se obtuvieron anticuerpos policlonales, capaces de reconocer al antigeno original HDC de rata, con interés en el desarrollo de métodos de purificación y diagnóstico de la proteína.