PROCEDIMIENTO PARA LA INTEGRACION DE ADN DIRIGIDA AL SITIO EN EL GENOMA DE PLANTAS

LAS PLANTAS. LA PRESENTE INVENCION FACILITA UN METODO PARA LA INTEGRACION DE SITUACION DIRIGIDA DE SECUENCIAS DE ADN EN EL GENOMA DE LAS PLANTAS A TRAVES DE RECOMBINACION HOMOLOGA, POR LA TRANSFORMACION DE DICHAS PLANTAS USANDO EL SISTEMA DE TRANSFERENCIA DE ADN DE "AGROBACTERIA", EN EL QUE EL ADN TRANSFORMADOR INCLUYE EN SU FORMA MAS SIMPLE UNA REGION HOMOLOGA AL EMPLAZAMIENTO DESEADO, ASI COMO UNA REGION DISTINTA DEL EMPLAZAMIENTO DESEADO TANTO JUNTO A UNO O ENTRE AMBOS BORDES DE T-ADN. SE FACILITAN CONSTRUCCIONES ESPECIALES, QUE EN SU FORMA MAS COMPLETA TIENEN LA ESTRUCTURA GENERAL (I), EN LA QUE LA CAJA (1) Y (7) REPRESENTAN LOS BORDES DE T-ADN, LAS CAJAS (2) Y (6) INCLUYEN CASILLAS DE EXPRESION FUNCIONAL QUE CONTIENEN GENES DE SELECCION NEGATIVA, LA CAJA (3) PROPORCIONA UNA REGION DE HOMOLOGIA CON EL EMPLAZAMIENTO DESEADO QUE PROMUEVE LA RECOMBINACION, LA CAJA (4) REPRESENTA UNA SECUENCIA DE ADN CON UNA MUTACION CON RESPECTO AL EMPLAZAMIENTO DESEADO, LA CAJA (5) REPRESENTA UNA CASILLADE EXPRESION FUNCIONAL CON UN GEN DE SELECCION POSITIVA, Y LA CAJA (E) CONTIENE UNA SECUENCIA DE ADN HOMOLOGA A UNA REGION ADYACENTE AL EMPLAZAMIENTO DESEADO , O CERCANA AL EMPLAZAMIENTO DESEADO, QUE PROMUEVE UNA RECOMBINACION HOMOLOGA. The present invention provides a method for site-directed integration of DNA-sequences into the genome of plants via homologous recombination, by transforming said plants using the DNA-transfer system of Agrobacterium, in which the transforming DNA comprises in its most simple form a region homologous to the target locus, as well as a region which is different from the target locus either next to one or between two T-DNA borders. Special constructs are provided, which in its most complete form have the general structure (I), in which box (1) and (7) represent T-DNA borders, boxes (2) and (6) comprise functional expression cassettes containing negative selection genes, box (3) provides a region of homology with the target locus promoting recombination, box (4) represents a DNA sequence containing a mutation with respect to the target locus, box (5) represents a functional expression cassette containing a positive selection gene, and box (E) comprises a DNA sequence which is homologous to a region adjacent of the target locus, or in the vicinity of the target locus, which promotes homologous recombination.