Method and kit for simultaneous determination of the activity of B-complex vitamins in food

The present invention relates to the method and analytical kit which can be used for simultaneous determination of absolute activity of five B-complex vitamins (B1, B2, B3, B5 and B6) in food, food- and bio-supplements and feed using LC-MS isotope - internal standard assay. The method and analytical kit are based on application of extraction vials containing lyophilised hydrolytic enzymes and isotope labeled internal standards of the B-complex vitamers, used for liberation of vitamers from phosphorylated and protein-bound forms and their conversion into the same chemical forms as the used internal standards, and for their following quantification by means of LC-MS or LC-MS/MS. The invention allows to minimize the time and labour used for sample preparation as well as the simultaneous, high-throughput determination of the activity of the five B-complex vitamins. Meetod ja testsüsteem B-kompleksi vitamiinide aktiivsuse samaaegseks kvantitatiivseks määramiseks on viie B-kompleksi vitamiini (B1, B2, B3, B5 ja B6) absoluutse aktiivsuse samaaegseks määramiseks toidus, toidu- ja biolisandites ning söödas, kasutades LC-MS-isotoop-sisestandardi-meetodit. Testsüsteemi lahendus baseerub ekstraktsiooniviaali lüofiliseeritud hüdrolüütilist aktiivsust omavate ensüümide ja isotooprikastusega B-kompleksi vitamiinide aktiivsust omavate vitameeride sisestandardite kasutamisel nii vastavalt proovis sisalduvate vitameeride ja kofaktorite viimiseks sisestandarditega samasse keemilisse vormi kui ka sellele järgnevaks kvantifitseerimiseks LC-MS- või LC-MS/MS-meetodil. Meetodi ja testsüsteemi kasutamine võimaldab minimeerida proovide ettevalmistamiseks vajalikku aega ja töömahtu ning analüüsida samaaegselt ja suure läbilaskvusega viie B-kompleksi vitamiini (B1, B2, B3, B5 ja B6) aktiivsust toidus ja toidulisandites, aga ka ravimpreparaatides ning muudes bioloogilistes proovides.