Process to determine and classify the intensity distribution of a fluorescent microscopic image by comparison of three images

In a process to classify a microscopic fluorescent image, in a first step a standard image is captured of a homogenous fluorescent reference sample. In a second step an image is captured of a non-volatile non-fluorescent homogenous reference sample. The two images are stored together with details of their respective illumination energy conditions. In a process to classify a microscopic fluorescent image, in a first step a standard image is captured of a homogenous fluorescent reference sample. In a second step an image is captured of a non-volatile non-fluorescent homogenous reference sample. The two images are stored together with details of their respective illumination energy conditions. In a third step a calculation is made of the reference matrices, the lateral detection sensitivities of fluorescent and false associated with these images. In a further step, a third image is captured with the same system of a real fluorescent sample illuminated by a suitable light energy. Using the reference matrices previously determined, a calculation is made of the real sample fluorescent fraction in the third image incorporating the values of illumination energy and the detected dark signal. Die Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Referenzierung von fluoreszenzmikroskopischen Aufnahmen, die in Verbindung mit einem bildgebenden, fluoreszenzmikroskopischen System aufgenommen sind, und unfaßt folgende Verfahrensschritte: DOLLAR A - Herstellung mindestens einer Aufnahme S¶1¶ einer homogen fluoresszierenden Referenzprobe mit einem bildgebenden, fluoreszenzmikroskopischen System und Normierung dieser Aufnahme, DOLLAR A - Herstellung mindestens einer Aufnahme S¶2¶ einer nichtfluoreszierenden, homogenen Referenzprobe mit dem bildgebenden, fluoreszenzmikroskopischen System, DOLLAR A - Speicherung dieser Aufnahmen S¶1¶ und S¶2¶ sowie der zugehörigen Beleuchtungsenergien E¶B¶, DOLLAR A - Berechnung von Referenzierungsmatrizen, der lateralen Detektionsempfindlichkeit für Fluoreszenzlicht D¶F¶(x,y) und der lateralen Detektionsempfindlichkeit für Falschlicht D¶A¶(x,y) aus den besagten Aufnahmen, DOLLAR A - Herstellung mindestens einer Aufnahme S¶3¶ einer realen fluoreszierenden Probe mit dem besagten bildgebenden System, wobei die Probe mit einer geeigneten Beleuchtungsenergie E¶B¶ beleuchtet wird, DOLLAR A - Ermittlung bzw. Berechnung des Fluoreszenzanteils in der Aufnahme S¶3¶ der realen Probe mit Hilfe besagter Referenzierungsmatrizen D¶F¶(x,y) und D¶A¶(x,y), wobei d