New peptide chain release factor B, useful for improving recombinant protein production in bacteria, also a more active variant and related nucleic acids, vectors and cells, accelerates release of proteins from the ribosome

Factor PrfB (peptide chain release factor B) having an amino acid (aa) sequence that is at least 93% identical with a 366 aa sequence (2), reproduced, is new. Independent claims are also included for the following: (1) variant (A) of PrfB that has, at least one of positions homologous to positions 71 and 100 of sequence (2), Asn or Ser, respectively, particularly both; (2) factor PrfB encoded by a nucleic acid (I) that is at least 80% identical with a 1102 base pairs (bp) sequence (1), reproduced; (3) (I) as new; (4) vector that contains (I); (5) cell, or its derivatives, obtained by transformation with (I); (6) method for preparing PrfB and its variants, using (I), the vector of (4) or the cell of (5); and (7) method for preparing proteins (X) by culturing bacteria in which PrfB activity is higher than normal. Die vorliegende Anmeldung betrifft den Faktor PrfB (peptide chain release factor B; RF-2) aus Bacillus licheniformis sowie alle mindestens zu 93% auf Aminosäure-Ebene und mindestens zu 80% auf DNA-Ebene identischen Faktoren PrfB. Diese und prinzipiell alle PrfB können zur Steigerung der Proteinbildungsrate bei Verfahren zur Proteinherstellung durch grampositive oder gramnegative Bakterien genutzt werden, insbesondere die, deren Sequenzen mit der vorliegenden Anmeldung bereitgestellt werden. Dabei handelt es sich um die aus den Spezies B. licheniformis, B. halodurans, B. subtilis und Escherichia coli. Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Anmeldung ist somit die zusätzliche Bereitstellung des Faktors PrfB zur Steigerung der Proteinbildungsrate bei Verfahren zur Proteinherstellung durch grampositive oder gramnegative Bakterien. Besonders vorteilhaft sind hierfür in ihrer Aktivität verbesserte Faktoren PrfB. Eine hinsichtlich ihrer Aktivität verbesserte Variante wurde mit den Aminosäureaustauschen S71N/N100S in homologer Lage zur Wildtypsequenz des PrfB aus B. licheniformis gefunden.