ΜΕΘΟΔΟΙ ΓΙΑ ΤΗΝ ΠΑΡΑΓΩΓΗ ΠΑΡΑΣΚΕΥΑΣΜΑΤΩΝ ΑΝΑΣΥΝΔΥΑΣΜΕΝΩΝ ΦΟΡΕΩΝ AAV ΥΨΗΛΟΥ ΤΙΤΛΟΥ ΑΠΑΛΛΑΓΜΕΝΩΝ ΑΠΟ ΒΟΗΘΗΤΙΚΟΥΣ ΙΟΥΣ

Η εφεύρεση παρέχει μεθόδους και συνθέσεις για την παραγωγή ουσιαστικά καθαρισμένων παρασκευασμάτων ανασυνδυασμένου αδενο-σχετιζόμενου ιού (AAV) υψηλού τίτλου, που μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως φορείς για την μεταφορά γονιδίων. Κατά την έναρξη της παραγωγής του φορέα, τα κύτταρα-παραγωγοί AAV της εφεύρεσης αυτής συνήθως περιλαμβάνουν ένα ή περισσότερα γονίδια συσκευασίας του AAV, έναν φορέα AAV που περιλαμβάνει ένα ετερόλογο (δηλαδή μη AAV) διαγονίδιο που μας ενδιαφέρει, και ένα βοηθητικό ιό, όπως έναν αδενοϊό. Τα παρασκευάσματα φορέων AAV που παράγονται γενικά δεν είναι ικανά αντιγραφής, αλλά είναι ικανά να μεσολαβούν στη μεταφορά ενός διαγονιδίου ενδιαφέροντος (όπως ενός θεραπευτικού γονιδίου) προς οποιοδήποτε από μία ευρεία ποικιλία ιστών και κυττάρων. Τα παρασκευάσματα φορέων AAV που παράγονται σύμφωνα με την παρούσα εφεύρεση είναι επίσης απαλλαγμένα από βοηθητικό ιό, καθώς και πρωτεΐνες βοηθητικού ιού και κυτταρικές πρωτεΐνες και άλλους επιμολυντές. Επίσης παρέχεται μια ποσοτική δοκιμασία υψηλής απόδοσης, χρήσιμη στην αξιολόγηση της ιικής μολυσματικότητας και αντιγραφής, καθώς επίσης και στη διαλογή των παραγόντων που επηρεάζουν την ιική μολυσματικότητα και/ή την αντιγραφή. This invention provides methods and compositions for producing high titer, substantially purified preparations of recombinant adeno-associated virus (AAV) that can be used as vectors for gene delivery. At the onset of vector production, AAV producer cells of this invention typically comprise one or more AAV packaging genes, an AAV vector comprising a heterelogous (i.e. non-AAV) transgene of interest, and a helper virus such as an adenovirus. The AAV vector preparations produced are generally replication incompetent but are capable of mediating delivery of a transgene of interest (such as a therapeutic gene) to any of a wide variety of tissues and cells. The AAV vector preparations produced according to this invention are also substantially free of helper virus as well as helper viral and cellular proteins and other contaminants. Also provided is a quantitative, high-throughput assay useful in the assessment of viral infectivity and replication, as well as in the screening of agents that affect viral infectivity and/or replication.