ΒΕΛΤΙΩΜΕΝΑ ΚΥΣΤΙΔΙΑ ΕΞΩΤΕΡΙΚΗΣ ΜΕΜΒΡΑΝΗΣ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ

Οι υπάρχουσες μέθοδοι της προηγούμενης τεχνικής για την παρασκευή μηνιγγιτικοκοκκικών OMV παρασκευάσματος εμπλέκουν την χρήση απορρυπαντικού κατά την διάρκεια της διάσπασης της βακτηριακής μεμβράνης. Σύμφωνα με την εφεύρεση, η διάσπαση της μεμβράνης ουσιαστικά γίνεται απουσία απορρυπαντικού. Τα OMV που προκύπτουν που διατηρούν σημαντικά ανοσογονικά συστατικά, ιδιαίτερα (i) την προστατευτική πρωτεΐνη επιφανείας NspA (ii) την πρωτεΐνη ΝΜΒ2132 και (iii) την πρωτεΐνη ΝΜΒ 1870. Η μέθοδος της εφεύρεσης τυπικά εμπλέκει τα ακόλουθα βασικά στάδια : (α) επεξεργασία βακτηριακών κυττάρων ουσιαστικά απουσία απορρυπαντικού, (β) φυγοκέντρηση της σύνθεσης του σταδίου (α) για τον διαχωρισμό των κυστιδίων της εξωτερικής μεμβράνης από τα επεξεργασμένα κύτταρα και από τα κυτταρικά κατάλοιπα και συλλογή του υπερκειμένου, (γ) εκτέλεση φυγοκέντρησης υψηλής ταχύτητας του υπερκειμένου του σταδίου (β) και συλλογή των κυστιδίων της εξωτερικής μεμβράνης σε ένα ίζημα, (δ) αναδιάλυση του ιζήματος από το στάδιο (γ) σε ένα ρυθμιστικό διάλυμα, (ε) εκτέλεση μίας δεύτερης φυγοκέντρησης υψηλής ταχύτητας σύμφωνα με το στάδιο, (γ) συλλογή κυστιδίων εξωτερικής μεμβράνης σε ένα ίζημα, (στ) αναδιάλυση του ιζήματος από το στάδιο (ε) σε ένα υδατικό διάλυμα. Existing methods of meningococcal OMV preparation involve the use of detergent during disruption of the bacterial membrane. According to the invention, membrane disruption is performed substantially in the absence of detergent. The resulting OMVs retain important bacterial immunogenic components, particularly the protective NspA surface protein. A typical process involves the following steps: (a) treating bacterial cells in the substantial absence of detergent; (b) centrifuging the composition from step (a) to separate the outer membrane vesicles from treated cells and cell debris, and collecting the supernatant; (c) performing a high speed centrifugation of the supernatant from step (b) and collecting the outer membrane vesicles in a pellet; (d) re-dispersing the pellet from step (c) in a buffer; (e) performing a second high speed centrifugation in accordance with step (c), collecting the outer membrane vesicles in a pellet; (f) re-dispersing the pellet from step (e) in an aqueous medium.