SISTEMA DE EXPRESIÓN DE ANTÍGENOS HETEROLOGOS EN E. COLI COMO PROTEÍNAS DE FUSIÓN

La presente invención está relacionada con la rama de la biotecnología y la ingeniería genética, particularmente con la expresión de proteínas heterólogas en microorganismos mediante su fusión, usando la tecnología del ADN recombinante, a péptidos bacterianos. El objetivo técnico que se persigue con la solución propuesta es el desarrollo de un procedimiento eficaz para la expresión en Escherichia coli de proteínas heterólogas como polipéptidos de fusión con vistas a su obtención con un alto grado de pureza, en cantidades comercialmente útiles, y de forma que permita su inclusión en preparados vacunales destinados al uso en humanos. Para lograr el mismo se emplea esencialmente una secuencia estabilizadora derivada de los primeros 47 aminoácidos del antígeno P64k de Neisseria meningitidis B:4:P1.15. En particular, se usa un plasmidio recombinante conteniendo dicha secuencia bajo el control del promotor triptófano de E. coli y del terminador de la transcripción del fago T4, incluyendo sitios de restricción que permiten la clonación en fase de fragmentos de ADN codificantes para polipéptidos de interés. El procedimiento objeto de la presente invención es aplicable en la industria farmacéutica, para el desarrollo de sistemas de diagnóstico, de preparados vacunales, y en cualquier situación donde sea necesaria la obtención en grandes cantidades de proteínas heterólogas como polipéptidos de fusión en E. coli. The present invention relates to biotechnology and genetic engineering, particularly the expression of heterologous proteins in microorganisms through their fusion, by applying the recombinant DNA technology, to bacterial peptides. The present invention provides an efficient process for the expression in Escherichia coli of heterologous proteins as fusion polypeptides with a view to obtaining them with a high degree of purity, in commercially useful amounts, and in an appropriate form for their inclusion in vaccine preparations intended to human use. To this effect, what is essentially used is a stabilizing sequence derived from the first 47 aminoacids of the antigen P64k of Neisseria meningitidis B:4 :P1.15. In particular, use is made of a recombinant plasmide containing said sequence, under the control of the triptophane promotor of E. coli and of the terminator of the transcription of the phage T4, including restriction sites which provide for the cloning in phase of DNA fragments coding for polypeptides of interest. The process of the invention is applic