DEVICES AND METHODS FOR NUCLEIC ACID IDENTIFICATION IN SAMPLES

A device, method, and non-transitory computer readable medium storing instructions for nucleic acid identification of material in a sample includes a microfluidics system, including a movable cartridge, and a heat source. The movable cartridge assembly includes at least one target-specific set of re...

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Hauptverfasser: PFEUFFER, KEVIN P, SATTERLY, NEAL G
Format: Patent
Sprache:eng ; fre
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Beschreibung
Zusammenfassung:A device, method, and non-transitory computer readable medium storing instructions for nucleic acid identification of material in a sample includes a microfluidics system, including a movable cartridge, and a heat source. The movable cartridge assembly includes at least one target-specific set of reagent components and a set of RCA-LAMP reaction components deposited on the surface. Moreover, the at least one target-specific set of reagent components includes at least one target specific padlock probe reagent component. The set of RCA?LAMP reaction components includes: at least one polymerase buffer component, at least one polymerase enzyme with strand displacement activity, a betaine additive, a TETRONIC additive, a sequence-specific probe, dNTPs, and a primer mix. The primer mix includes both a forward inside primer and a backward inside primer specific to a backbone of the at least one target specific padlock probe reagent component. Un dispositif, un procédé et un support lisible par ordinateur non transitoire stockant des instructions pour l'identification d'acide nucléique de matériau dans un échantillon comprennent un système microfluidique, comprenant une cartouche mobile, et une source de chaleur. L'ensemble cartouche mobile comprend au moins un ensemble spécifique à une cible de constituants réactifs et un ensemble de constituants de réaction RCA-LAMP déposés sur la surface. De plus, au moins un ensemble spécifique à une cible de constituants réactifs comprennent au moins un constituant réactif de sonde cadenas spécifique cible. L'ensemble de constituants de réaction RCA-LAMP comprend : au moins un constituant tampon de polymérase, au moins une enzyme polymérase ayant une activité de déplacement de brin, un additif de bétaïne, un additif TETRONIC, une sonde spécifique à une séquence, des dNTP et un mélange d'amorces. Le mélange d'amorces comprend à la fois une amorce intérieure avant et une amorce intérieure arrière spécifique à un squelette de l'au moins un constituant réactif de sonde cadenas spécifique cible.