CODON-OPTIMIZED CAS9 ENDONUCLEASE ENCODING POLYNUCLEOTIDE

It was now found that the expression of a nucleotide sequence as described in the method of the invention in a plant cell results in much higher rates of indels compared to those seen in cells transformed with a control nucleic acid molecule. Thus, the invention is directed to codon-optimized Cas9 endonuclease-encoding polynucleotide. Accordingly, the present invention provides a method for modifying a target site in the genome of a plant cell, the method comprising providing one or more guide RNA and a Cas endonuclease to said plant cell, wherein said guide RNA and Cas endonuclease are capable of forming a complex that enables the Cas endonuclease to introduce a double strand break at said target site, and wherein the Cas9 endonuclease is expressed in the plant cell from a polynucleotide comprising an codon-optimized Cas9 endonuclease encoding nucleic acid molecule with a nucleotide sequence selected from the disclosed nucleotide sequences. Il a maintenant été découvert que l'expression d'une séquence nucléotidique telle que décrite dans le procédé de l'invention dans une cellule végétale conduit à des taux beaucoup plus élevés d'indels par comparaison avec ceux observés dans des cellules transformées par une molécule d'acide nucléique témoin. Ainsi, l'invention concerne un polynucléotide codant pour une endonucléase Cas9 à codons optimisés. En conséquence, la présente invention concerne un procédé de modification d'un site cible dans le génome d'une cellule végétale, le procédé comprenant la fourniture d'un ou plusieurs ARN guide et d'une endonucléase Cas à ladite cellule végétale, ledit ARN guide et l'endonucléase Cas étant capables de former un complexe qui permet à l'endonucléase Cas d'introduire une cassure double brin au niveau dudit site cible, et l'endonucléase Cas9 étant exprimée dans la cellule végétale à partir d'un polynucléotide comprenant une molécule d'acide nucléique codant pour une endonucléase Cas9 à codons optimisés avec une séquence nucléotidique choisie parmi les séquences nucléotidiques décrites.