A TRANSPOSON-BASED TRANSFECTION SYSTEM FOR PRIMARY CELLS

The present invention relates to the field of genetic engineering, in particular, to a transposon-based transfection kit suitable for transfection of primary cells, such as T cells, comprising mRNA encoding a transposase, or reagents for generating mRNA encoding said transposase, as well as minicircle DNA comprising the transposon. The invention also relates to a nucleic acid, preferably, a DNA minicircle, comprising a transposon, wherein the transposon encodes a protein and at least one miRNA, wherein the sequences encoding the miRNA are located in an intron and expression of the protein and the miRNA is regulated by the same promoter. The invention also provides a population of cells obtainable with the method of the invention. Methods of transfection are also provided, as well as medical use, e.g. in immunotherapy, in particular, in adoptive T cell therapy or T cell receptor (TCR) or chimeric antigen receptor (CAR) gene therapy. La présente invention concerne le domaine du génie génétique, en particulier un kit de transfection à base de transposon approprié pour la transfection de cellules primaires, telles que des lymphocytes T, comprenant un ARNm codant pour une transposase, ou des réactifs permettant de générer un ARNm codant pour ladite transposase, ainsi qu'un ADN minicercle comprenant le transposon. L'invention concerne également un acide nucléique, de préférence un minicercle d'ADN, comprenant un transposon, le transposon codant pour une protéine et au moins un miARN, les séquences codant pour le miARN étant situées dans un intron et l'expression de la protéine et du miARN étant régulée par le même promoteur. L'invention concerne également une population de cellules pouvant être obtenue par le procédé de l'invention. L'invention concerne également des procédés de transfection, ainsi qu'une utilisation médicale, par exemple en immunothérapie, en particulier, dans une thérapie adoptive à base de lymphocytes T ou une thérapie génique par récepteur de lymphocytes T (TCR) ou récepteur d'antigène chimérique (CAR).